JoVE Encyclopedia of Experiments
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 3:20 min • July 8th, 2025
Inizia con una configurazione elettrofisiologica contenente un segmento di colon di topo immobilizzato in una soluzione elettrolitica bilanciata.
Il colon ha un ganglio pelvico maggiore esposto con un ramo nervoso sensoriale afferente del colon pre-sezionato che trasmette segnali dal colon al cervello.
Il colon è cannulato ad entrambe le estremità con valvole a tre vie per l'infusione salina.
Riempire l'elettrodo di registrazione e posizionarlo vicino al nervo afferente.
Applicare una leggera aspirazione per tirare il nervo nell'elettrodo, formando una tenuta ermetica.
Monitorare il segnale elettrico del nervo di base e la pressione interna del colon.
Chiudere il rubinetto sulla cannula di uscita mentre si infonde continuamente la soluzione salina nel colon.
Ciò provoca un graduale aumento della pressione all'interno del colon, con conseguente distensione del colon e stimolazione del nervo afferente.
Registrare nuovamente il segnale nervoso e la pressione del colon.
Un aumento graduale del segnale nervoso con l'aumento della pressione conferma la stimolazione nervosa afferente.
Ispezionare una pipetta di vetro pre-estratta al microscopio da dissezione. Rompere la punta dell'elettrodo con un paio di pinze, in modo che sia di dimensioni compatibili con il diametro del nervo da registrare. Successivamente, smussare la punta posizionandola vicino a una svasatura più chiara.
Gli individui che non conoscono questa metodologia possono anche trovare difficile smussare la punta dell'elettrodo in modo compatibile con le dimensioni del nervo.
Quindi, posizionare l'elettrodo smussato nel portaelettrodo. Quindi, collegare una siringa da 10 millilitri alla porta laterale del supporto per l'applicazione di una pressione negativa o positiva all'elettrodo. Successivamente, collegare il supporto allo stadio principale del bioamplificatore e montare lo stadio principale su un manipolatore.
Successivamente, spostare l'elettrodo nel bagno di tessuto e riempire l'elettrodo con la soluzione di Krebs applicando una leggera aspirazione, fino a quando non tocca il filo d'argento del supporto. Quindi, posizionare la punta dell'elettrodo vicino all'estremità tagliata del nervo e applicare una pressione negativa per aspirare il nervo nell'elettrodo. Quindi, applicare più pressione negativa in modo che circa 1 millimetro del nervo venga tirato nell'elettrodo e formi una tenuta ermetica.
Ora, accendi il bioamplificatore e imposta il filtro da 300 a 3.000 hertz. Monitora il segnale sull'oscilloscopio e registra il segnale nervoso e il segnale di pressione intraluminale nel software di elaborazione dati Spike. Quindi, applicare la distensione a rampa del colon chiudendo il rubinetto a tre vie sulla cannula di uscita mentre si infonde continuamente per via intraluminale. Monitorare la pressione intraluminale fino a raggiungere i 60 millimetri di mercurio.