JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 2:50 min. • July 8th, 2025
Inizia con una camera di registrazione contenente un segmento sezionato di un digiuno di topo, una parte dell'intestino tenue, immerso in una soluzione elettrolitica e fissato con uno spillo.
Il segmento digiunale comprende il tessuto adiposo circostante con un nervo afferente mesenterico pre-sezionato, che trasmette segnali dal digiuno al cervello.
Il segmento è collegato alle porte di afflusso e di uscita della camera per il flusso della soluzione.
Prendi un elettrodo di aspirazione collegato a un micromanipolatore e un'unità di registrazione.
Riempire l'elettrodo di aspirazione con la soluzione elettrolitica e posizionarlo vicino al nervo afferente mesenterico.
Applicare una leggera aspirazione per tirare il nervo con il tessuto adiposo circostante per formare una tenuta ermetica.
Chiudere la porta di uscita mantenendo l'afflusso per aumentare gradualmente la pressione interna e la distensione del segmento digiunale.
Ciò provoca l'eccitazione del nervo afferente mesenterico attorno al digiuno, generando un segnale elettrico.
Registrare l'attività nervosa afferente in risposta alle variazioni di pressione digiunale.
In questa procedura, utilizzando un micromanipolatore, si abbassa la punta dell'elettrodo di aspirazione nel bagno d'organo. Quindi, aspirare delicatamente un po' di soluzione di Krebs dal bagno d'organo in modo che la punta dell'elettrodo sia immersa nella soluzione di Krebs. Assicurarsi che la soluzione di Krebs copra l'elettrodo a filo all'interno dell'elettrodo di aspirazione.
Quindi, posizionare la punta dell'elettrodo di aspirazione immediatamente accanto al filamento nervoso afferente sezionato e disegnare il filamento nervoso sezionato nel capillare per tutta la sua lunghezza. Manovrare la punta dell'elettrodo verso il tessuto adiposo e aspirarlo nel capillare di vetro con lo stantuffo, sigillando così meccanicamente il nervo nel capillare dal contenuto del bagno d'organo.
Per verificare la registrazione dell'attività del nervo afferente, eseguire un aumento dell'attivazione afferente indotto dalla distensione di rampa chiudendo la porta di uscita per portare ad un graduale aumento della pressione nel segmento intestinale. Eseguire il protocollo sperimentale desiderato solo quando tre distensioni consecutive della rampa producono una scarica multi-unità riproducibile.