Definizione di un patch clamp a cellula intera per la registrazione elettrofisiologica dai neuroni sensoriali vomeronasali

Prendi una fetta coronale dell'organo vomeronasale chemiosensoriale da un topo transgenico che esprime neuroni sensoriali marcati in fluorescenza.

L'epitelio sensoriale contiene questi neuroni marcati, che sono esposti al lume collegato alla cavità nasale per rilevare i segnali chimici.

Fissare la fetta in una camera di imaging utilizzando un'ancora a fetta.

Trasferire la camera in una configurazione di registrazione e far fluire una soluzione extracellulare ossigenata per mantenere la vitalità dei tessuti.

Posizionare una pipetta di perfusione vicino alla fetta per introdurre stimoli chimici e una pipetta di registrazione sui neuroni sensoriali.

Utilizzando un microscopio a fluorescenza, identificare i neuroni marcati.

Applicare una pressione positiva per evitare l'intasamento della pipetta e avvicinarsi a un neurone fino a quando non si forma una fossetta sulla membrana.

Passare alla pressione negativa, aspirando la membrana nella pipetta.

Applicare l'aspirazione per rompere la membrana e stabilire la continuità con il citoplasma, chiamata patch clamp a cellula intera, consentendo l'introduzione di stimoli chimici e registrando i segnali elettrofisiologici risultanti.

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