Impianto di un gruppo di elettrodi in un cervello di topo per la registrazione elettrofisiologica

Fissare un mouse anestetizzato su un telaio stereotassico contenente un termoforo per mantenere la temperatura corporea.

Applicare un lubrificante per evitare che gli occhi si secchino e iniettare una soluzione elettrolitica per via sottocutanea per mantenere l'idratazione.

Rimuovere il pelo dal cuoio capelluto, disinfettare l'area e iniettare un analgesico per via sottocutanea per ridurre il dolore.

Fai un'incisione per esporre il cranio, quindi puliscilo per rendere visibili i punti di riferimento anatomici per identificare le regioni del cervello.

Applicare l'adesivo dentale e indurirlo con una lampada polimerizzante per facilitare l'impianto dell'elettrodo.

Praticare dei fori sopra l'ippocampo e il cervelletto e montare un gruppo elettrodo utilizzando un supporto sul telaio stereotassico.

Gli elettrodi bipolari registrano l'attività dell'ippocampo, mentre un elettrodo di riferimento ottiene l'attività basale dal cervelletto.

Inserire gli elettrodi, fissare il gruppo con cemento dentale e staccarlo dal supporto.

Somministrare nuovamente la soluzione elettrolitica e un analgesico.

Consentire al mouse di riprendersi completamente prima di eseguire la registrazione elettrofisiologica.

Prima di procedere con l'intervento, registrare il peso dei topi VGAT-Cre di 8 settimane. Quindi, posizionare l'animale in una camera di induzione per indurre l'anestesia. Posizionare il mouse anestetizzato su un termoforo a 37 gradi Celsius. Se si utilizza un sistema di temperatura controllata da feedback, inserire la sonda di temperatura nel retto dell'animale per il monitoraggio della temperatura durante l'intervento chirurgico. Per iniziare l'intervento chirurgico, reindirizzare il flusso di anestesia inalante al cono nasale e montare l'animale nel telaio stereotassico posizionando delicatamente i denti superiori anteriori nella barra incisiva e spostare il cono sul naso, quindi posizionare le barre auricolari nelle orecchie e fissarle al telaio stereotassico.

Assicurarsi che la testa dell'animale sia livellata e centrata e non possa essere spostata quando viene leggermente sondata. Una volta che l'animale è montato, iniettare 0,5 millilitri di normosol sui topi per l'idratazione e applicare lubrificante oculare per prevenire l'essiccazione corneale. Monitora la profondità dell'anestesia pizzicando un dito del piede dell'arto posteriore. Se il riflesso di ritiro è assente nell'animale, procedere alla rimozione dei peli del cuoio capelluto del topo intorno all'area chirurgica. Al termine, disinfettare tre volte l'area della pelle pulita con un'applicazione alternata di etanolo e iodio terminando con iodio e iniettare 0,05 millilitri di bupivacaina allo 0,25% per via sottocutanea.

Fai un'incisione sul cranio usando un bisturi, quindi taglia una parte della pelle con le forbici chirurgiche esponendo il cranio. Spingere la pelle da parte prima di pulire il cranio da tutti i tessuti sottostanti con un batuffolo di cotone. Pulisci il cranio con perossido di idrogeno usando tamponi di cotone sterili e rendi visibili le suture del cranio, la bregma e la lambda. Con il trapano montato stereotassicamente, spostare la punta del trapano sulle coordinate bregma e zero x, y e z, quindi sollevare e spostare il trapano su lambda per determinare le sue coordinate per determinare se la testa è a livello.

Dopo aver asciugato accuratamente il cranio, applicare una goccia di adesivo dentale automordenzante con l'applicatore. Attendere 60 secondi prima di polimerizzare l'adesivo dentale con una luce UV dentale per 40 secondi. Una superficie lucida indica che l'adesivo è stato efficacemente reticolato con il cranio. Con l'aiuto di una punta da trapano da 0,031 pollici, praticare con cura due fori bilateralmente nel cranio a 5.000 rotazioni al minuto, o RPM, evitando di perforare il cervello. Applicare una goccia di soluzione salina per migliorare la perforazione dei fori di fresatura. Per l'impianto di elettrodi di profondità dell'ippocampo, forare a 3 millimetri posteriormente e 3 millimetri lateralmente da bregma.

Praticare un foro per l'elettrodo di riferimento sopra il cervelletto, dietro la lambda a 6 millimetri posteriormente e 0 millimetri lateralmente dal bregma. Quindi, montare il piedistallo a sei pin con gli elettrodi assemblati nel portaelettrodo su un telaio stereotassico. Allineando gli elettrodi sopra i fori di fresatura corrispondenti, abbassare lentamente e navigare l'auricolare per individuare le due punte degli elettrodi bipolari proprio sopra i fori di fresatura dell'ippocampo sinistro e destro e, se necessario, regolare l'elettrodo di riferimento in modo che si libra sopra il foro, sopra il cervelletto.

Quando gli elettrodi di torsione dell'ippocampo si trovano proprio sopra i fori, azzerare l'asse z e abbassare lentamente l'elettrodo a meno tre millimetri nell'ippocampo destro e sinistro e guidare l'elettrodo di riferimento nel foro sopra il cervelletto. Preparare il cemento dentale mescolando la polvere e il liquido in una ciotola per mescolare, quindi coprire la superficie del cranio, gli elettrodi e lo spazio tra la superficie del cranio e la parte inferiore del piedistallo con cemento dentale.

Una volta che il cemento si asciuga e si indurisce, staccare il portaelettrodo dal braccio stereotassico, sollevare il braccio e rimuovere il supporto dal piedistallo. Dopo aver somministrato al topo per via sottocutanea ketoprofene e normosol, rimuovere l'animale dal telaio stereotassico per spostare l'animale sul tappetino riscaldato nella gabbia del vivaio. Una volta completamente sveglio, rimetti il singolo animale nella gabbia del vivaio, nutrilo con cibo morbido e monitora la perdita di peso ogni giorno fino a 72 ore dopo l'intervento.