JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 7:22 min. • July 8th, 2025
Prendi segmenti di un'arteria cerebrale posteriore di topo.
Incubare con una soluzione enzimatica per degradare la matrice tissutale, allentando le cellule.
Sostituire la soluzione con un tampone, quindi trasferire un segmento in una camera di registrazione.
Dissociare meccanicamente il tessuto connettivo e gli strati delle cellule muscolari lisce, isolando il tubo endoteliale sottostante.
Fissare la provetta, rimuovere gli strati dissociati e aggiungere un tampone fisiologico.
Collocare la camera all'interno di un sistema di registrazione con flusso tampone continuo.
Introdurre un indicatore di calcio fluorescente che entra nelle cellule endoteliali, quindi inserire un elettrodo di registrazione in una cellula.
Somministrare un farmaco che innesca l'afflusso di ioni calcio e induce la segnalazione a valle per il rilascio di calcio dal reticolo endoplasmatico.
L'indicatore si lega al calcio e, dopo l'eccitazione, emette fluorescenza.
L'aumento del calcio attiva i canali del potassio calcio-dipendenti, causando il deflusso di potassio e alterando il potenziale di membrana.
Registrare simultaneamente le variazioni del calcio intracellulare tramite il segnale fluorescente e il potenzi
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