Test della funzione del nervo sensoriale in un modello murino denervato chirurgicamente

Inizia con un topo anestetizzato con la pelle dorsale esposta. Disinfettare l'area e coprirla.

Fai un'incisione sulla linea mediana dal collo fino a poco sopra la coda.

Tirare la pelle sul lato sinistro per creare un lembo di pelle ed esporre il tessuto sottostante.

Metti il mouse al microscopio e individua i nervi sensoriali.

Tirare e rimuovere con cautela questi nervi senza interrompere i vasi sanguigni.

Inumidire il tessuto e rimuovere i nervi rimanenti dal lembo cutaneo, creando un'area denervata.

Sul lato destro, lasciare intatti i nervi come controllo. Sutura l'incisione cutanea.

Consenti al mouse di riprendersi.

Per valutare la denervazione stabile diverse settimane dopo l'intervento chirurgico, utilizzare lo stesso topo denervato con la pelle dorsale rasata.

Utilizzando un ago, pungere l'area di controllo, generando una stimolazione meccanica.

Questo eccita i nervi sottostanti, inviando un segnale al cervello e provocando la risposta del topo.

Tuttavia, la puntura dell'area denervata non riesce a generare una risposta, confermando il ruolo dei nervi sensoriali.

Anestetizzare l'animale. Radere l'intera pelle dorsale e pulire l'area in modo simile alla procedura di biopsia. Ora, fai un'incisione usando un bisturi sterile lungo la linea mediana dorsale dalla base del collo, a circa mezzo centimetro sopra la coda. Usando una pinza smussata sterile, rifletti delicatamente la pelle sul lato sinistro lontano dal fianco, per visualizzare il tessuto sottostante dai cuscinetti adiposi scapolari vicino al collo fino a appena sopra l'arto posteriore.

Ora, identifica i nervi cutanei dorsali con un microscopio ottico da dissezione. Questi appaiono come filamenti bianchi che viaggiano caudalmente attraverso la fascia traslucida della parete del tronco prima di fare curve strette ed entrare nel tessuto connettivo sciolto sotto la pelle. Successivamente, utilizzando una pinza ultrasottile, rimuovere i nervi esclusivamente dal lato sinistro dell'animale situato nei siti anatomici da T3 a T12 strappandoli da dove i loro segmenti si piegano sulla parete del tronco fino ai loro siti di ingresso nella pelle.

Orientare il forcipe verticalmente e afferrare i nervi a circa mezzo centimetro sotto i loro siti di curvatura. Una volta afferrato, tirare verso l'alto per far allungare il nervo e separarlo dal tessuto circostante per rimuoverli. Evitare di danneggiare i vasi sanguigni adiacenti. Assicurarsi di mantenere il tessuto umido durante tutta la procedura applicando periodicamente gocce di soluzione salina sterile allo 0,9%.

Continuare a rimuovere tutti i nervi che si estendono dalla parete del tronco alla pelle, ma non interrompere i nervi all'interno della fascia densa della parete del tronco. Quindi, rimuovere eventuali nervi dal lembo cutaneo esposto. Queste fibre comprendono i rami distali dei nervi cutanei dorsali e appaiono come filamenti ramificati bianchi situati sporadicamente all'interno del tessuto connettivo sul lato dermico del lembo cutaneo.

Per rimuovere questi rami sottili, posizionare la pinza approssimativamente parallela alla superficie dermica, afferrare i nervi e strappare verso l'alto. Rimuovi tutti i nervi visibili in questo modo. Non perforare i vasi sanguigni e la pelle.

Durante questa fase, è importante evitare di rompere i vasi sanguigni vicini. Se trovi un nervo con un vaso sanguigno adiacente, seguilo ventralmente fino a un'area in cui non c'è un vaso adiacente e rimuovilo pizzicando.

Ora, rifletti senza mezzi termini la pelle sul lato destro dell'incisione della linea mediana dorsale, ma non rimuovere alcun nervo. Questo servirà come controllo controlaterale azionato da sham. Infine, suturare l'animale e monitorare il postoperatorio come prima. Successivamente, per confermare la perdita stabile dei nervi settimane dopo l'intervento chirurgico, pungere delicatamente l'area denervata utilizzando un ago ipodermico sterile. Nota se l'animale risponde in genere rabbrividendo o girando la testa. Se l'area della pelle è stata denervata in modo stabile, l'animale mostrerà poca o nessuna risposta.