Registrazione dei potenziali postsinaptici eccitatori del campo neuronale in fette acute dell'ippocampo

Posizionare una fetta di ippocampo di topo in una camera di immersione riempita con liquido cerebrospinale artificiale, o aCSF.

Fissare la fetta con una rete di fissaggio per evitare movimenti.

Far circolare continuamente l'aCSF ossigenato per mantenere la vitalità neuronale.

Installare gli elettrodi di riferimento per fornire un riferimento di tensione stabile.

Posizionare gli elettrodi di stimolazione e registrazione in linea e parallelamente allo strato piramidale CA1 dell'ippocampo.

Applicare impulsi elettrici.

Questi impulsi stimolano i neuroni, provocando l'apertura dei canali ionici voltaggio-dipendenti, consentendo agli ioni positivi di fluire e innescando potenziali d'azione.

Questi potenziali d'azione si propagano lungo i neuroni e inducono il rilascio di neurotrasmettitori eccitatori nella fessura sinaptica.

I neurotrasmettitori si legano a recettori specifici sui neuroni postsinaptici, consentendo l'afflusso di ioni positivi e provocando un cambiamento nel potenziale di membrana, il potenziale postsinaptico eccitatorio, o EPSP.

L'elettrodo di registrazione misura l'EPSP da una popolazione di neuroni all'interno della regione di registrazione, il campo EPSP.

Immergere in anticipo un piccolo pezzo di carta per la pulizia delle lenti e una rete di nylon fissata su un filo di platino a forma di U nella camera di immersione per alcuni minuti. Successivamente, rimuovere il filo di platino a forma di U. Spegnere il riciclaggio e posizionare una fetta sulla carta per la pulizia delle lenti. Quindi, posizionare immediatamente la rete che tiene la fetta sopra la fetta.

Accendere la pompa e lasciare equilibrare la fetta per 30 minuti senza immergere l'obiettivo nell'ACSF. Nel frattempo, riempire l'elettrodo di registrazione con ACSF e montarlo nel portapipetta.

Quindi, posizionare l'elettrodo di stimolazione in tungsteno con isolamento epossidico testato nel supporto del manipolatore e il filo di riferimento nella camera a fette. Aggiungere un secondo elettrodo di riferimento alla camera e collegarlo alla presa di riferimento dello stadio di testa dell'elettrodo di registrazione.

Nel software di controllo dell'amplificatore, fare clic sulla casella Modalità Zero-clamp, quindi fare doppio clic sulla casella Elenco guadagni di uscita. Scegli un guadagno di 100. Fare doppio clic sul riquadro del filtro passa-alto. Scegliere 3 kilohertz e fare doppio clic sulla casella di riepilogo del filtro passa-basso CA per scegliere 0,1 hertz.

Nel software di registrazione, fare clic su Acquisisci protocollo aperto. Scegli un protocollo che abbia le impostazioni che consentono le stimolazioni episodiche e la digitalizzazione dei potenziali amplificati da 10 a 20 kilohertz per 50-100 millisecondi e che attivi automaticamente un isolatore di stimolo 10 millisecondi dopo l'inizio di una registrazione episodica.

Posizionare gli elettrodi di stimolazione e registrazione in linea e parallelamente allo strato piramidale. Successivamente, fare clic su Acquisisci modifica protocollo e scegliere la scheda Trigger nella finestra pop-up. Fare clic sulla casella Sorgente trigger e scegliere la barra spaziatrice come sorgente trigger. Quindi, fare clic sul pulsante OK e fare clic sul pulsante Registra per avviare l'acquisizione.

Nel software dell'isolatore di stimolo, fare clic sulla casella di controllo della tensione e inserire zero. Fare clic sul pulsante Download. Successivamente, fai clic sulla finestra del software di registrazione e premi la barra spaziatrice. Ripetere questo ciclo inserendo in sequenza valori da 1.000 a 8.000. Correlare la forza di stimolazione con i valori di pendenza FEPSP e determinare la forza di stimolazione richiesta per ottenere il 40% della pendenza massima FEPSP. Fare clic sulla casella di controllo della tensione e immettere il valore determinato. Quindi, fai clic sul pulsante Download.

Nel software di registrazione, fare clic sul pulsante Interrompi, quindi sul menu Acquisisci. Fare clic su Modifica protocollo e scegliere la scheda Trigger nella finestra pop-up. Successivamente, fai clic sulla casella Sorgente trigger e scegli il Timer interno come sorgente di trigger. Fare clic sul pulsante OK, seguito dal pulsante Registra che avvia la registrazione automatica dei potenziali di campo ogni 60 secondi. Fare clic sul pulsante Interrompi dopo 30-60 minuti.

Nel software di registrazione, fare clic su Acquisisci protocollo aperto e scegliere lo stesso protocollo della registrazione di base. Fare clic sul pulsante OK e quindi su Registra. Continua a eseguire automaticamente le registrazioni del potenziale sul campo per due o quattro ore. Al termine, fare clic sul pulsante Stop per terminare la registrazione.