JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 2:53 min. • July 8th, 2025
Fissare un preparato del tronco encefalico-midollo spinale da un roditore appena nato in una camera di registrazione con un flusso di aCSF ossigenato. Rimuovere il fazzoletto sottile che copre il preparato.
La rete neuronale del tronco encefalico genera un'attività elettrica ritmica, chiamata scoppio inspiratorio, trasmessa attraverso i motoneuroni della quarta radice ventrale del midollo spinale, o C4, per controllare la respirazione.
Posizionare una pipetta di registrazione vicino alla radice nervosa e utilizzare l'aspirazione per aspirare la radice all'interno, formando un sigillo.
Le proprietà intrinseche dei neuroni del tronco encefalico causano l'afflusso di sodio, depolarizzando la membrana e generando un potenziale d'azione, seguito da un deflusso di potassio per la ripolarizzazione.
La conseguente iperpolarizzazione impedisce la formazione di nuovi potenziali d'azione fino a quando l'ATPasi sodio-potassio utilizza l'ATP per ripristinare il potenziale di membrana.
I potenziali d'azione si propagano alla radice nervosa come esplosioni ritmiche.
Flusso di aCSF privato di ossigeno per interrompere la produzione di ATP e compromettere la funzione dell'ATPasi, ritardando i potenziali d'azione e diminuendo le esplosioni ritmiche.
Il ritorno all'aCSF ossigenato recupera il numero di esplosioni ritmiche.
In questa procedura, posizionare il tessuto nervoso nella camera di registrazione con il lato ventrale rivolto verso l'alto. Fissalo con degli spilli nella parte più bassa del midollo spinale e nella parte più rostrale del tronco encefalico. Successivamente, rimuovere la membrana aracnoidea, che è un tessuto sottile che copre la superficie del tessuto nervoso. Fare attenzione a non rimuovere la pia madre e i vasi sanguigni del tessuto nervoso. Quindi, riempire l'elettrodo con ACSF.
Utilizzando un micromanipolatore, posizionare con cautela l'elettrodo vicino alla quarta radice ventrale. Aspirare delicatamente la radichetta nervosa utilizzando la siringa. Quindi, posizionare l'elettrodo con la radichetta nervosa contro il midollo spinale. Successivamente, registrare le attività elettrofisiologiche generate dal tessuto nervoso in condizioni normossiche per almeno 20 minuti per determinare i parametri di base del preparato.
Cambiare la soluzione di perfusione da ACSF a bolle di carbogeno a ACSF di stimolo ipossia e registrare per 15 minuti. Successivamente, rimettere la soluzione di perfusione in ACSF standard a bolle di carbogeno e registrare per almeno altri 15 minuti prima di terminare la registrazione.