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Neuroscienze
0 visualizzazioni • 2:58 min. • July 8th, 2025
Fissare una fetta di cervello in una camera di registrazione con una perfusione continua di aCSF contenente un alto contenuto di magnesio che blocca i recettori del glutammato N-metil-D-aspartato o NMDA.
Posizionare gli elettrodi di stimolazione e registrazione nello strato radioattivo di Cornu ammonis 1 o CA1 dell'ippocampo.
Stimolare per ottenere un segnale elettrico, confermando le connessioni neuronali intatte.
Riposizionare l'elettrodo stimolante sullo strato oriens e l'elettrodo di registrazione sullo strato piramidale, quindi inserirli più in profondità.
Applicare stimolazioni tetaniche, impulsi elettrici ad alta frequenza per indurre il rilascio eccitatorio di glutammato del neurotrasmettitore dagli assoni collaterali di Schaffer.
Il glutammato si lega ai recettori del glutammato sui neuroni CA1, facilitando l'afflusso di sodio e la depolarizzazione della membrana.
Questo sblocca i recettori NMDA, consentendo l'afflusso di sodio e calcio e migliorando l'eccitazione dei neuroni.
Gli interneuroni eccitati nello strato oriens rilasciano il neurotrasmettitore inibitorio GABA, interagendo con i neuroni CA1.
Questo equilibrio di input eccitatori e inibitori porta a un'eccitazione controllata sincronizzata della rete neuronale CA1, generando onde cerebrali ritmiche chiamate oscillazioni gamma, cruciali per l'attenzione e la memoria.
Per montare la fetta nella camera di registrazione, posizionare una fetta di cervello in una camera di registrazione sommersa perfusa con ACSF che scorre da 1 a 2 millilitri al minuto e riscaldata a 32 gradi Celsius. L'ACSF utilizzato per le registrazioni differisce da quello nella camera di mantenimento, poiché la concentrazione di magnesio è aumentata da 2 millimolari a 4 millimolari.
Fissare la fetta posizionando un peso semicircolare in acciaio inossidabile su di essa con i suoi fili paralleli al CA1 ippocampale. Successivamente, aumentare la velocità di perfusione a 8-10 millilitri al minuto a 32 gradi Celsius.
Utilizzando un microscopio da dissezione, spostare l'elettrodo stimolante al centro dello strato oriens. Quindi, spostare l'elettrodo di registrazione sullo strato piramidale il più vicino possibile all'elettrodo di stimolazione. Successivamente, abbassare sia l'elettrodo di stimolazione che quello di registrazione da 50 a 100 micrometri nella fetta per generare il campo EPSP di 1 millivolt in risposta all'impulso di prova da 120 a 150 microampere.
Per generare oscillazioni gamma, stimolare il tessuto con un treno di impulsi 20 volte 0,1 millisecondi erogati a 200 hertz. Questo stimolo tetanico può produrre risposte riproducibili se somministrato ogni 5 minuti.