JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 2:53 min. • July 8th, 2025
Monta una mosca di Drosophila viva in un tubo con la testa esposta, le antenne attaccate a del nastro adesivo e fissate da un'asta di fissaggio.
Mantenere il preparato sotto un flusso costante di aria umidificata per evitare l'essiccazione.
Inserire l'elettrodo di riferimento attraverso il clipeo, una struttura di supporto che protegge l'apparato boccale, per raggiungere il sistema circolatorio.
Posizionare l'elettrodo di registrazione vicino al sensillo, l'organo sensoriale dell'insetto.
Inserire l'elettrodo nella base del sensillo.
Registra i segnali con picchi specifici per confermare il corretto posizionamento degli elettrodi vicino ai neuroni del recettore olfattivo.
Collegare una cartuccia contenente l'odorizzante di prova al tubo di mandata.
Posizionare il tubo puntando verso l'antenna della mosca, regolando l'altezza e la distanza dagli elettrodi.
Utilizzando il software, impostare la portata dell'odore e la quantità di dosaggio, quindi rilasciare l'odorizzante.
Ora, registra i segnali elettrici per catturare la risposta neuronale della mosca all'odore.
Per effettuare le registrazioni, inserire l'elettrodo di riferimento nel clipeo con un movimento rapido e fluido. Posizionalo appena sotto la cuticola dove sarà a contatto con l'emolinfa. Quindi, abbassare lentamente l'elettrodo di registrazione fino a quando non entra nello stesso piano visivo del sensillo target. Quindi, inserire l'elettrodo di registrazione nella base sensillare.
Prima di procedere, assicurarsi che vi sia un elevato rapporto segnale/rumore, con picchi identificabili dai neuroni at4A e at4C. Il neurone at4A non dovrebbe sparare a una velocità non superiore a 20 hertz.
Ora, collega la cartuccia al tubo di erogazione dell'odorizzante. In questo caso, è collegata una cartuccia di acido palmitoleico. Quindi, usa il micromanipolatore per manovrare la cartuccia verso la preparazione mentre la punti verso la testa. Posizionare la punta della cartuccia puntando direttamente verso l'antenna da una distanza di circa 4 millimetri. La cartuccia deve inoltre trovarsi a circa 1 millimetro sopra il vetrino.
La cartuccia può essere strettamente delimitata dagli elettrodi e dal vetrino. Idealmente dovrebbe essere ad almeno quattro millimetri da entrambi gli elettrodi. Per la stimolazione, impostare il regolatore di flusso dell'odorizzante su raffiche di 500 millisecondi e utilizzare una portata di 500 millilitri al minuto. Per ogni esplosione di stimolo, registrare l'attività elettrica per 10 secondi.