Registrazione delle risposte sinaptiche CA3-CA1 in una fetta di ippocampo di ratto

Posiziona una fetta di ippocampo di ratto in una configurazione di elettrofisiologia.

Posizionare gli elettrodi stimolanti nello strato radio della regione CA1 dell'ippocampo, che riceve le proiezioni assonali dai neuroni CA3.

Posizionare un elettrodo di registrazione vicino ai dendriti apicali CA1.

Posizionare un altro elettrodo di registrazione nello strato piramidale.

Dopo la stimolazione, le proiezioni assonali di CA3 si depolarizzano e generano potenziali d'azione, rilasciando neurotrasmettitori eccitatori.

Questi neurotrasmettitori si legano ai dendriti apicali postsinaptici CA1, inducendo un afflusso di ioni positivi e una depolarizzazione della membrana, chiamata potenziale postsinaptico eccitatorio o EPSP.

Le misure degli elettrodi di registrazione sommavano gli EPSP dai dendriti apicali, il campo EPSP o fEPSP. Una volta ottenuti segnali fEPSP stabili, abbassare gli elettrodi e fare una breve pausa.

Applicare una gamma di intensità di stimolazione per determinare la relazione input-output con la pendenza fEPSP, quindi selezionare e applicare un'intensità specifica in base alla pendenza.

Il secondo elettrodo di registrazione misura i potenziali d'azione combinati dei corpi cellulari neuronali CA1, generando picchi di popolazione.

Negli esperimenti di marcatura e cattura sinaptica, al microscopio, posizionare i due elettrodi stimolanti nello strato radiale della regione CA1 per stimolare le fibre collaterali di Schaffer e un elettrodo di registrazione nella regione dendritica apicale di CA1 a metà strada tra gli elettrodi stimolanti per registrare le risposte fEPSP.

Posizionare un altro elettrodo di registrazione nello strato piramidale per registrare il picco di popolazione. Quando tutti gli elettrodi toccano la fetta, erogare una stimolazione di prova per garantire che sia possibile ottenere un segnale EPSP di campo adeguato in entrambi gli ingressi.

Una volta ottenuto un segnale fEPSP corretto, con attenzione, abbassare gli elettrodi di circa 200 micron utilizzando le manopole di movimento fine dei manipolatori, quindi attendere 20 minuti affinché la fetta si riprenda. Successivamente, determinare la relazione ingresso/uscita misurando la pendenza del campo EPSP su una gamma di intensità di corrente da 20 microampere a 100 microampere.

Quindi, per ogni input, impostare l'intensità di stimolazione che evoca il 40% della pendenza massima del campo EPSP come stimoli costanti durante l'esperimento. Dopo 15-20 minuti, iniziare a registrare la linea di base.

Registrare un basale stabile di almeno 30-60 minuti prima dell'induzione LTP/LTD.