JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 3:41 min. • July 8th, 2025
Attacca una Drosophila melanogaster anestetizzata e geneticamente modificata su un lato a un vetrino coprioggetti.
Estendere le zampe anteriori e fissarle per esporre i segmenti tarsali.
Questi segmenti hanno neuroni gustativi che esprimono complessi indicatori di calcio che emettono fluorescenza in forma legata al calcio.
Disegna una barriera idrofobica attorno alla mosca per trattenere la soluzione.
Lasciare che la mosca si riprenda e sovrapporre una soluzione salina tamponata sui segmenti tarsali esposti per inumidirli.
Al microscopio confocale, osservare i segmenti tarsali e visualizzare i neuroni gustativi a varie profondità per ottenere una fluorescenza pre-stimolazione.
Aggiungere una soluzione di stimolazione contenente ligandi lipofili sul segmento.
Questi ligandi si legano ai recettori dei neuroni gustativi, avviando le vie di segnalazione e innescando l'apertura dei canali del calcio.
Ciò consente agli ioni calcio del fluido extracellulare di entrare nel citoplasma e legarsi ai complessi indicatori di calcio, con conseguente emissione di fluorescenza.
Quando osservato di nuovo, un aumento della fluorescenza neuronale conferma la risposta fisiologica neuronale al ligando.
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