Impianto di un elettrodo nel nucleo subtalamico di un ratto

Preparare un ratto anestetizzato, fissato su un'unità stereotassica.

Fai un'incisione sulla linea mediana.

Rimuovere il periostio, esponendo le suture del cranio.

Contrassegnare il nucleo subtalamico destro o le coordinate STN per l'impianto dell'elettrodo.

Praticare un foro e ritrarre la membrana.

Praticare fori aggiuntivi e fissare le viti ossee.

Allineare l'elettrodo monopolare con le coordinate STN e inserirlo delicatamente nella regione.

Collegare l'elettrodo al sistema di registrazione. Mettere a terra l'unità stereotassica e coprire il ratto con un foglio di alluminio per evitare interferenze elettromagnetiche.

Far avanzare l'elettrodo, monitorando l'attività neurale, per colpire l'STN identificato dal suo schema di attivazione irregolare.

Fissare gli impianti con cemento dentale.

Scollegare il sistema di registrazione.

Collegare il connettore dello stimolatore all'elettrodo e metterlo a terra. Fissare l'assemblaggio con cemento dentale.

Chiudere l'incisione.

Collegare la spina dello stimolatore al cavo girevole per la stimolazione STN.

Rimetti il topo nella sua gabbia e consenti il recupero.

Usa un bisturi per praticare un'incisione sulla linea mediana che inizia tra le orecchie e si estende in avanti per circa 2 centimetri. Assicurarsi che anche il periostio sia inciso, quindi esporre il cranio con quattro morsetti. Utilizzare un batuffolo di cotone per rimuovere delicatamente il periostio fino a quando le suture coronali e sagittali non sono esposte. Tampona il sangue con un batuffolo di cotone. Fissare un ago su un supporto della sonda, quindi contrassegnare la punta dell'ago con un pennarello nero.

Utilizzando le viti di azionamento antero-posteriore, laterale della linea mediana e dorso-ventrale, posizionare la punta dell'ago direttamente sopra il bregma. Prendi le letture della scala dei noni AP e ML. Sottrarre 3,6 millimetri dalla lettura AP e 2,5 millimetri dalla lettura ML per l'impianto dell'elettrodo nell'STN destro.

Abbassare la punta dell'ago sulla superficie del cranio per contrassegnare il sito di iniezione con il colorante del pennarello. Fissare il trapano dentale sul grande supporto della sonda dello strumento stereotassico. Sposta il trapano dentale nel punto contrassegnato sul cranio e, mentre guardi attraverso il microscopio, pratica un foro di circa 1 millimetro di diametro attraverso il cranio fino a quando la dura madre non è visibile. Questo è il foro per l'elettrodo.

Ritrarre la dura madre utilizzando una pinza per microdissezione o un ago sterile, poiché la dura dura è abbastanza resistente da distruggere la punta dell'elettrodo. Praticare un foro con il trapano dentale in ogni squama frontale e nello squama parietale opposto al foro per l'elettrodo. Successivamente, praticare un foro in ogni squama interparietale. Avvitare una vite ossea in ciascuno dei cinque fori. Evitare di avvitare le viti troppo in profondità, che eserciteranno pressione sul cervello. Il numero di giri dipenderà dal passo della vite. Qui vengono utilizzati due o tre giri di ciascuna vite.

Scollegare il supporto della sonda dallo strumento stereotassico e bloccare il supporto della sonda con l'elettrodo nel micromanipolatore. Utilizzando le viti di azionamento AP, ML e DV, spostare il supporto della sonda con l'elettrodo fino a quando la punta non tocca quasi il bregma. Notare le letture delle scale di nonio AP, ML e DV a bregma. Quindi, sollevare l'elettrodo di alcuni millimetri per evitare che l'elettrodo raschi il cranio durante il movimento.

Per determinare le coordinate della posizione in cui l'elettrodo deve essere inserito nel foro, aggiungere 3,6 millimetri alla lettura AP e aggiungere 2,5 millimetri alla lettura ML. Utilizzando le viti di azionamento AP e ML, spostare l'elettrodo nella posizione calcolata. A questo punto, la punta dell'elettrodo deve essere posizionata direttamente sopra il foro dell'elettrodo praticato.

Quindi, guardando attraverso il microscopio, abbassare l'elettrodo al livello della dura. Notare che questo è 0 nella direzione DV. Quindi, inserire delicatamente la punta dell'elettrodo nel cervello mentre si guarda attraverso il microscopio. Collegare il pin dell'elettrodo al connettore del sistema di registrazione. Mettere a terra lo strumento stereotassico con il contrappeso della stanza.

Quindi, posiziona una gabbia di Faraday sopra il ratto nello strumento stereotassico. Al posto di una gabbia di Faraday, puoi anche usare un foglio di alluminio come mostrato qui poiché il suo effetto è lo stesso di quello di una gabbia di Faraday. Avviare il sistema di registrazione registrando l'attività elettrica durante l'avanzamento dell'elettrodo. L'attività elettrica specifica dell'STN è solitamente rilevabile a una profondità compresa tra 7,5 e 8,1 millimetri dalla dura dura.

L'attività tipica dei neuroni nell'STN è caratterizzata da un pattern di attivazione irregolare e da un'elevata velocità di attivazione. Ora, tamponare il sangue o il liquido cerebrospinale che è stato spostato sulla superficie del cranio durante l'abbassamento dell'elettrodo. Quindi, mescola una piccola quantità di cemento dentale, quindi usa una piccola spatola per applicarlo attorno all'elettrodo e intorno a quattro delle cinque viti.

Quando il cemento dentale si è indurito, scollegare il perno dell'elettrodo dal portaelettrodo e dal connettore del sistema di registrazione. Quindi, svitare la quinta vite che non è stata fissata con il cemento dentale. Mettere la spina sul perno dell'elettrodo e fissare il filo di terra della spina con la quarta vite. Applicare del cemento dentale attorno al tappo. Man mano che il cemento si addensa, modellalo attorno al tappo per formare un tappo. Evitare gli spigoli vivi del cemento dentale che potrebbero danneggiare l'animale e rimuoverli durante l'indurimento.

Sbrigliare i bordi della ferita e chiuderli con una sutura dietro il cappuccio e nella parte anteriore. Disinfettare i bordi della ferita. Collegare la spina della testa al filo fissato su una parte girevole. Quindi, rimuovere il ratto dallo strumento stereotassico. Somministrare un'appropriata analgesia postoperatoria. Qui vengono utilizzati 12,5 milligrammi per chilogrammo di tramadolo. Posiziona il topo in una gabbia pulita con supporto termico e fissa la girella su questa gabbia. Osservare il recupero dell'animale.