Elettrofisiologia optogenetica Registrazione di cellule con canali ionici dipendenti dalla luce

Posizionare un vetrino coprioggetti contenente cellule renali embrionali che esprimono canali ionici dipendenti dalla luce e una proteina reporter fluorescente su una camera di misurazione applicata al silicio. Chiudilo e aggiungi un buffer esterno.

Posizionare questa camera al microscopio. Posizionare un elettrodo da bagno riempito di agar. Perfondere con un tampone per rimuovere i terreni residui e le cellule morte.

Utilizzando un filtro a fluorescenza, identificare e mettere a fuoco la cellula bersaglio.

Collegare una pipetta patch a un micromanipolatore. Applicare pressione per evitare l'intasamento e avvicinarsi alla cella.

Posizionare la pipetta vicino alla cellula e rilasciare una pressione positiva per formare un cerotto di membrana sul puntale.

Dopo aver formato il cerotto della membrana, applicare una pressione negativa per rompere la membrana.

Applicare una luce di una lunghezza d'onda specifica per aprire i canali ionici. Il movimento degli ioni viene registrato come variazione di tensione da parte dell'elettrodo.

Per iniziare, sigillare la camera di misura con silicone per evitare perdite dal tampone esterno. Quindi, posizionare un vetrino coprioggetti nella camera e c