Registrazioni perforate Patch-Clamp dei corpi cellulari dei neuroni sensoriali dell'orecchio interno

Posizionare una coltura di corpi cellulari di neuroni sensoriali dell'orecchio interno in una camera di registrazione.

Riempire frontalmente una pipetta patch-clamp con una soluzione interna.

Riempire con la stessa soluzione contenente un antibiotico perforante la membrana, permettendogli di raggiungere gradualmente la punta.

Riempire due terzi della pipetta con la soluzione antibiotica, inserirla in un supporto contenente un elettrodo di registrazione e abbassarla nella camera.

Visualizza al microscopio per avvicinarti a un neurone.

Quando la punta della pipetta entra in contatto con il neurone, la superficie neuronale forma una fossetta e la resistenza aumenta.

Applicare una pressione negativa per formare una tenuta ermetica tra la pipetta e la membrana.

Mantenere il potenziale di tenuta vicino al potenziale di membrana a riposo.

L'antibiotico perfora la membrana, consentendo il movimento degli ioni tra la cellula e l'elettrodo per stabilire un ambiente ionico stabile.

Applicare gradini di tensione ai canali ionici voltaggio-dipendenti aperti, consentendo l'afflusso di ioni e generando correnti proporzionali alla funzione del canale ionico, che vengono registrate dall'elettrodo.