JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 2:41 min. • July 8th, 2025
Iniziare con un dispositivo microfluidico compartimentato rivestito di laminina posizionato su un array multielettrodo modellato o MEA.
Il dispositivo trasporta neuroni glutammatergici corticali derivati da iPSC in coltura aderiti a microelettrodi di un MEA.
Questi neuroni comunicano tramite segnali elettrici. Registrare questi segnali come attività neuronale di base.
Successivamente, semina il dispositivo con cellule di glioma pediatrico di alto grado ricche di glutammato, un tipo di cellula tumorale cerebrale, e incuba.
Nel tempo, le cellule di glioma entrano nel canale e si attaccano, stabilendo la co-coltura. Successivamente, le cellule di glioma rilasciano glutammato, un neurotrasmettitore eccitatorio.
Il glutammato rilasciato interagisce con i recettori neuronali, portando a un afflusso di ioni calcio e sodio che provoca la depolarizzazione della membrana neuronale.
Ciò induce l'eccitabilità neuronale e migliora l'attività neuronale.
Registra nuovamente i segnali elettrici e un aumento significativo dopo la co-coltura indica una riuscita interazione tra neuroni e cellule di glioma.
Seminare le cellule tripsinizzate UW479 e BT35 sopra i neuroni glutammatergici aderenti maturi in ciascun dispositivo microfluidico dedicato. Mantenere le co-colture per due giorni in un ambiente controllato a 37 gradi Celsius e 5% di anidride carbonica con il neurone glutammatergico D11 e successivo terreno.
Contare le cellule di glioma pediatrico di alto grado utilizzando le immagini microscopiche analizzate con il software di analisi delle immagini per valutarne la vitalità e calcolare la percentuale di cellule. Posizionare l'MFD nel dispositivo di registrazione e utilizzare un software disponibile in commercio per eseguire la registrazione elettrofisiologica dei neuroni glutammatergici il 21° giorno.
Prima di seminare cellule di glioma pediatrico di alto grado, eseguire una seconda registrazione elettrofisiologica dei neuroni glutammatergici differenziati coltivati come controllo, parallelamente alla co-coltura.