JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 3:07 min. • July 8th, 2025
Inizia con colture aderenti di neuroni di pollo embrionali precoci su array multielettrodi rivestiti di matrice extracellulare, o MEA.
La base dei MEA contiene griglie di minuscoli elettrodi che registrano l'attività neuronale.
Nella coltura di prova, i neuroni crescono in presenza di una tossina, mentre nella coltura di controllo, i neuroni crescono senza la tossina.
Prima di registrare, sostituire i terreni in entrambi i MEA con terreni privi di tossine e incubare brevemente.
Quindi, posizionare un MEA nel dispositivo di registrazione e iniziare la registrazione.
I neuroni comunicano tramite impulsi elettrici chiamati potenziali d'azione o picchi.
A livello della sinapsi, questi potenziali d'azione innescano il rilascio di neurotrasmettitori, propagando il segnale al neurone successivo.
Gli elettrodi MEA registrano i picchi generati dai neuroni sinapticamente connessi.
Nella condizione di controllo, la rete neuronale matura sana mostra un'attività di spiking sincrona.
Nella coltura di prova, la riduzione dello spiking e della sincronia suggerisce una ridotta maturazione della rete neuronale causata dalla tossina.
Il giorno dell'acquisizione, sostituire il terreno di coltura con un terreno neurobasale fresco e rimettere gli array nell'incubatore di CO2 per almeno due ore prima della registrazione. Avviare il software di registrazione e impostare la temperatura dell'array multi-elettrodo a 37 gradi Celsius facendo clic sull'icona della temperatura. Imposta i parametri di acquisizione selezionando i flussi nel pannello della finestra di sinistra e facendo clic con il pulsante destro del mouse sull'icona della musa. Quindi, seleziona Aggiungi elaborazione e rilevatore di picchi e fai clic su OK nella finestra pop-up. Spike Detector 6 di STD apparirà sotto il nome del file.
Quindi, fai clic con il pulsante destro del mouse sul rilevatore di picchi, seleziona Aggiungi rilevamento di elaborazione e burst e fai clic su OK nella finestra pop-up. Burst Detector ISI apparirà sotto l'icona della musa. Quindi fare clic con il pulsante destro del mouse su Burst Detector, selezionare Aggiungi compilatore di elaborazione e statistiche neurali. Nella finestra pop-up, assicurarsi che siano selezionate le opzioni Intestazione file, Statistiche pozzetto aggregate e Sincronia. Fare clic su OK.
Il compilatore di statistiche apparirà di seguito. Fare clic sull'icona dell'orologio nella parte inferiore dello schermo e modificare le informazioni nella sezione Impostazioni per registrare ogni 5,1 minuti e registrare per cinque minuti. Questa operazione verrà avviata immediatamente e verrà eseguita una sola volta. Dopo aver recuperato l'array multi-elettrodo dall'incubatrice, posizionarlo sull'unità di registrazione e bloccarlo in posizione. Avvia la registrazione dell'attività di rete facendo clic su Avvia registrazione nella sezione di registrazione programmata.