Immunocolorazione a fluorescenza di neuroni ippocampali di ratto all'interno di un chip microfluidico

Prendete un chip microfluidico contenente neuroni dell'ippocampo di ratto.

Il chip è dotato di serbatoi somatici e assonali, con compartimenti divisi da microsolchi, che compartimentalizzano efficacemente i neuroni e isolano le regioni somatiche e assonali.

Rimuovere il terreno e aggiungere la formaldeide. Incubare per fissare i neuroni e preservarne la struttura.

Rimuovere la formaldeide in eccesso e lavare con tampone. Quindi, aggiungi un detergente per permeabilizzare i neuroni.

Sostituire il detergente con una soluzione bloccante per bloccare i siti di legame non specifici.

Rimuovere la soluzione bloccante e incubare con anticorpi primari che si legano a specifici marcatori sinaptici neuronali, che sono proteine di membrana integrali sulle vescicole sinaptiche.

Rimuovere gli anticorpi non legati e lavare con tampone.

Incubare con anticorpi secondari marcati con fluorofori che si legano agli anticorpi primari che hanno come bersaglio i marcatori sinaptici.

Rimuovere gli anticorpi secondari non legati e lavare con tampone.

Sotto un microscopio confocale, visualizzare il chip per visualizzare i marcatori sinaptici neuronali fluorescenti.

Per iniziare l'immunocolorazione a fluoresc