JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 4:45 min. • July 8th, 2025
Prendete i neuroni corticali primari di ratto in un piatto rivestito di polimero con fondo di vetro.
Fissare i neuroni con paraformaldeide per preservare le strutture cellulari.
Lavare via la paraformaldeide in eccesso.
Aggiungere un detergente non ionico per permeabilizzare le cellule.
Trattare le cellule con una colorazione fluorescente verde mirata alla proteina strutturale actina filamentosa, o F-actina.
Rimuovere la macchia in eccesso.
Applicare un agente bloccante per prevenire il legame non specifico degli anticorpi.
Incubare con anticorpi primari che hanno come bersaglio le proteine dendritiche.
Rimuovere gli anticorpi non legati.
Aggiungere anticorpi secondari rossi coniugati con fluorofori per legarsi agli anticorpi primari. Lavare via gli anticorpi in eccesso.
Applicare un colorante fluorescente per macchiare i nuclei. Rimuovere il colorante non legato.
Aggiungere un reagente anti-dissolvenza per prevenire il fotosbiancamento con fluoroforo.
Utilizzando la microscopia a fluorescenza, acquisisci immagini dei neuroni.
Identificare una regione ricca di F-actina all'interno del dendrite marcato.
Utilizzando il software, conta i punti o le macchie di F-actina e traccia manual
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