JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 3:15 min. • July 8th, 2025
Prendi un ratto anestetizzato e applica un anestetico sul suo occhio per intorpidire i riflessi.
Taglia i baffi e disinfetta l'area intorno all'occhio per prevenire la contaminazione.
Al microscopio, bloccare la palpebra inferiore per gonfiare l'occhio, esponendo la vena episclerale.
Questa vena si collega alla camera anteriore tramite il canale di Schlemm e la rete trabecolare per il deflusso dell'umore acqueo.
Inserire un microago con soluzione fisiologica ipertonica nella vena esposta.
Iniettare la soluzione salina, spostando il sangue. Eseguire una seconda iniezione opposta alla prima per un effetto uniforme su tutto l'occhio.
La soluzione salina entra nella rete trabecolare.
L'alta concentrazione di sale provoca stress osmotico, portando alla morte cellulare e alla cicatrizzazione dei tessuti. Questa cicatrice blocca il deflusso dell'umore acqueo attraverso la rete, aumentando la pressione intraoculare.
L'elevata pressione danneggia le cellule gangliari retiniche, che sono neuroni che trasportano informazioni visive al cervello. Il danno porta al glaucoma, una condizione che causa la perdita della vista.
In questa procedura, dopo aver anestetizzato l'animale con il cocktail KAX, controllare i riflessi dando pizzichi ai piedi o alla coda per assicurarsi che l'animale sia incosciente. Quindi, taglia i baffi con le forbici. Successivamente, saturare un applicatore con punta di cotone con una soluzione di betadina e tamponare l'area intorno all'occhio sperimentale.
Al microscopio, usa un emostatico per bloccare la palpebra inferiore in modo da gonfiare l'occhio, esporre la vena episclerale e limitare il movimento dell'occhio. Successivamente, perforare con cura la vena episclerale con il micro-ago con un angolo compreso tra 10 e 20 gradi rispetto alla vena. Una puntura nella vena ha successo quando si osserva che il sangue entra nella punta del microago.
Iniettare lentamente 50 microlitri di soluzione fisiologica nella vena. Le vene sbiancano mentre il sale circola attraverso il sistema vascolare, ma alcune regioni possono mantenere un aspetto rosso sangue.
Il singolo passaggio più critico in questa procedura si verifica durante l'iniezione della soluzione salina a due molari. È imperativo che si verifichi lo sbiancamento nel sistema vascolare per garantire un esito positivo. Mantenere un ago fermo con un angolo di 20 gradi è fondamentale per questa procedura.
Successivamente, eseguire una seconda iniezione nella vena per garantire un danno completo dello strato di cellule gangliari retiniche. In pochi minuti, si dovrebbe vedere un distinto aspetto torbido attraverso l'iride dell'occhio mentre il sale circola attraverso il sistema vascolare.