Isolamento delle fibrille amiloidi dall'estratto di tessuto cerebrale
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 4:38 min. • July 8th, 2025
Prendi un estratto di tessuto cerebrale di topo contenente proteine non amiloidi e fibrille amiloidi, un aggregato proteico insolubile.
Aggiungere il saccarosio solido e mescolare, aumentando la densità della soluzione.
Trasferirlo e centrifugarlo per separare le proteine più dense dai detriti.
Scartare il surnatante, risospendere il pellet in un tampone a concentrazione di saccarosio più elevata, mescolare e centrifugare.
Raccogli lo strato superiore contenente alcune fibrille amiloidi in un tubo nuovo, aggiungi un tampone di lavaggio e mescola.
Ora, scartare lo strato intermedio e trasferire il pellet arricchito con fibrille amiloidi nel tubo contenente la frazione dello strato superiore per il massimo isolamento.
Centrifugare le frazioni combinate e scartare il surnatante. Aggiungere un tampone di digestione e incubare per degradare esclusivamente le proteine non amiloidi.
Centrifugare e rimuovere il surnatante. Lavare il pellet per rimuovere le proteine digerite residue.
Risospendere il pellet in un tampone di solubilizzazione a base di saccarosio contenente un detergente che solubilizza le restanti proteine non amiloidi.
Centrifugare, rimuovere il surnatante e risospendere le
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