JoVE Encyclopedia of Experiments
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 2:59 min • July 8th, 2025
Prendi una sospensione di citomegalovirus murino, geneticamente modificato per esprimere una proteina fluorescente verde potenziata, che ne consente la visualizzazione.
Caricare la sospensione in una siringa con un ago inserito.
Quindi, anestetizzare un cucciolo di topo mettendolo sul ghiaccio.
Identificare il sito di iniezione sulla testa del cucciolo.
Inserire l'ago perpendicolarmente alla superficie del cranio fino a raggiungere il ventricolo laterale, un liquido cerebrospinale o una cavità riempita di liquido cerebrospinale nel cervello.
Iniettare la sospensione nel ventricolo laterale.
Lascia che il cucciolo si riprenda.
Il virus iniettato circola attraverso il liquido cerebrospinale ventricolare, raggiungendo le cellule ependimali dell'area marginale e le cellule epiteliali del plesso coroideo.
Il virus si attacca ai recettori di superficie di queste cellule, internalizza, subisce la replicazione e si diffonde da una cellula all'altra, stabilendo un'infezione acuta nel plesso coroideo, nell'area marginale e nella zona subventricolare.
Inizia sterilizzando una siringa da 10 microlitri e un ago calibro 27 con alcol al 70%. Quindi, caricare 5 microlitri di soluzione per iniezione di citomegalovirus murino o microsfere fluorescenti nell'ago tirando con cautela lo stantuffo della siringa.
Dopo aver anestetizzato e immobilizzato un topo neonatale P0.5 posizionandolo sul ghiaccio per tre o quattro minuti, utilizzare il metodo di risposta del pizzicamento delle dita dei piedi per determinare la profondità dell'anestesia. Contrassegnare il sito di iniezione sul topo anestetizzato con una penna da laboratorio non tossica in una posizione a circa 0,7-1,0 millimetri lateralmente alla sutura sagittale e a 0,7-1,0 millimetri caudale dal bregma neonatale. Questo diagramma mostra il sito in modo più dettagliato.
Per riferimento, segnare a 2 millimetri dalla punta dell'ago con un pennarello non tossico. Quindi, inserire l'ago a 2 millimetri di profondità, perpendicolare alla superficie del cranio nel sito di iniezione contrassegnato. Quindi, iniettare lentamente 5 microlitri di citomegalovirus murino nel ventricolo laterale senza aprire il cuoio capelluto.
In un altro gruppo di topi, iniettare una soluzione da 5 microlitri contenente microsfere fluorescenti con lo stesso metodo. Dopo l'iniezione, lasciare che l'ago rimanga in posizione per 10-20 secondi per evitare il riflusso. Quindi, rimuovere lentamente l'ago. Lasciare che gli animali iniettati si riprendano per 5-10 minuti in un contenitore caldo fino a quando il movimento e la reattività generale non vengono ripristinati.