Immunoprecipitazione di complessi proteina-DNA bersaglio dal lisato del motoneurone
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 2:55 min. • July 8th, 2025
Inizia con un tubo contenente perline magnetiche pretrattate rivestite con anticorpi specifici per una proteina bersaglio reticolata al DNA.
Aggiungere un lisato di motoneurone contenente frammenti di DNA e incubare agitando.
I frammenti di DNA interagiscono con le perle rivestite di anticorpi, formando complessi perlina-DNA.
Centrifugare per raccogliere il liquido dal tappo e posizionarlo su un separatore magnetico per far precipitare i complessi perlina-DNA.
Rimuovere il surnatante contenente frammenti di DNA non legati.
Introdurre un tampone di lisi a base di detergente per solubilizzare frammenti di DNA non specificamente legati.
Centrifugare ed eseguire la separazione magnetica, quindi rimuovere il surnatante.
Lavare con un tampone ad alto contenuto di sale per interrompere le interazioni non specifiche. Centrifugare, eseguire la separazione magnetica e rimuovere il surnatante.
Lavare con tampone LiCl per rimuovere le restanti interazioni non specifiche. Centrifugare, eseguire la separazione magnetica e rimuovere il surnatante.
Infine, lavare con tampone Tris-HCl, centrifugare ed eseguire la separazione magnetica.
Rimuovere il surnatante e raccogliere le perle contenenti i com
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