Visualizzazione dei neuroni del corpo a fungo nel cervello di Drosophila tramite immunocolorazione

Mettere i cervelli di Drosophila wild-type e mutanti in una soluzione contenente un fissativo e un detergente. Incubare con un leggero dondolio.

Il fissativo preserva la morfologia tissutale, mentre il detergente permeabilizza le membrane cellulari.

Lascia che il cervello si calmi, quindi rimuovi la soluzione.

Lavare i fazzoletti con un tampone.

Aggiungere una soluzione bloccante per prevenire il legame di anticorpi non specifici.

Rimuovere la soluzione e aggiungere anticorpi primari mirati a una proteina specifica che regola lo sviluppo assonale nel corpo dei funghi del cervello, o neuroni MB.

Incubare per promuovere il legame degli anticorpi.

Lavare con tampone per rimuovere gli anticorpi non legati.

Incubare con anticorpi secondari coniugati con fluorofori che hanno come bersaglio gli anticorpi primari.

Lavare di nuovo per rimuovere gli anticorpi non legati, quindi risospendere il cervello in un mezzo di montaggio.

Monta i cervelli su un vetrino a ponte e visualizzali al microscopio a fluorescenza.

Rispetto al wild-type, i cervelli mutanti mostrano un fenotipo difettoso, con proiezioni errate assonali e lobi MB mancanti.

Al microscopio, utilizzare una pipetta P200 per trasferire