Determinazione della tossicità indotta da nanoparticelle nei neuroni utilizzando la microglia come biosensore surrogato
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 3:51 min. • July 8th, 2025
Prelevare le colture microgliali in una piastra a più pozzetti contenente terreni.
Sostituire metà del terreno nel pozzetto di prova con un mezzo contenente nanoparticelle d'argento e nel pozzetto di controllo con un mezzo del veicolo. Incubare.
Le microglia internalizzano le nanoparticelle, si attivano e rilasciano citochine pro-infiammatorie.
Trasferire il terreno del veicolo e il terreno condizionato contenente queste citochine in filtri montati su provette di raccolta.
Centrifugare per rimuovere le nanoparticelle, trattenendo le citochine.
Capovolgere i filtri in nuove provette di raccolta, centrifugare e raccogliere il terreno. Aggiungi nuovi supporti.
Successivamente, prendi le colture neuronali ipotalamiche.
Sostituire metà del supporto del pozzetto di controllo con il supporto del veicolo e il supporto del pozzetto di prova con il supporto condizionato. Incubare.
Le citochine si legano ai recettori sui neuroni ipotalamici, attivando le vie di segnalazione che inducono la morte neuronale.
Aggiungere la resazurina e incubare.
Nelle cellule vive, gli enzimi deidrogenasi riducono la resazurina debolmente fluorescente a resorufina fluorescente.
Misurare la fluorescenza.
La ridot
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