Visualizzazione delle motilità delle vescicole nei neuroni mediante imaging a fluorescenza
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 3:45 min. • July 8th, 2025
Assumere il plasmide desiderato in terreni privi di siero. Questo plasmide codifica per proteine specifiche della vescicola con tag fluorescenti.
In un'altra provetta, assumere il reagente di trasfezione diluito in terreno privo di siero.
Mescolare le due soluzioni e incubare.
Il reagente di trasfezione si combina con il plasmide, formando un complesso.
Prendi un pozzetto contenente neuroni aderenti nei media con il siero. Aggiungere i complessi e incubare. Il complesso facilita l'ingresso del plasmide nella cellula.
Scartare il supporto per rimuovere i complessi non internalizzati.
Aggiungere il terreno fresco e poi incubare.
Il plasmide entra nel nucleo per essere trascritto e viene quindi tradotto in proteine fluorescenti specifiche della vescicola che etichettano le vescicole nei neuroni.
Utilizzando un microscopio a fluorescenza a temperatura controllata, è possibile acquisire immagini a intervalli di tempo specificati.
Per analizzare le immagini, definire i parametri di tracciamento.
Identifica la vescicola di interesse e registra le sue coordinate in ciascuna delle immagini.
Compila i dati per visualizzare il movimento della vescicola.
In questa procedura, mescolare 4 microg
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