Generazione di organoidi neuronali dopaminergici da cellule staminali embrionali umane

Prendi le cellule staminali embrionali umane, o hESC, in un pallone rivestito di matrice extracellulare.

Sostituire il terreno con un mezzo di induzione neurale e incubare, differenziando le hESC in colonie di cellule progenitrici neurali, o NPC.

Aggiungere una soluzione enzimatica per dissociare le colonie.

Centrifugare, rimuovere il surnatante e risospendere le cellule in un mezzo di induzione con fattori di crescita per supportare la differenziazione delle NPC.

Aggiungere la sospensione cellulare su micropozzetti di forma piramidale inversa per formare neurosfere tridimensionali.

Trasferire le neurosfere su una piastra rivestita di matrice extracellulare contenente un mezzo di differenziazione con fattori di crescita e piccole molecole. Incubare sotto agitazione per promuovere la differenziazione in neuroni progenitori dopaminergici.

Sostituire il terreno con un terreno di maturazione neurale e posizionare le neurosfere su un disco di membrana in un inserto a pozzetto di coltura, consentendo la diffusione di aria e sostanze nutritive.

Incubare in condizioni statiche per formare organoidi tridimensionali costituiti da neuroni dopaminergici maturi.

Questi organoidi, che imitano un