JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 2:24 min. • July 8th, 2025
Inizia con un ratto anestetizzato e fai un'incisione sopra l'orbita dell'occhio.
Sezionare il tessuto sottocutaneo per accedere alla cavità orbitale, che contiene il nervo ottico.
Al microscopio, sezionare la congiuntiva, seguita dal tessuto connettivo sottostante.
Quindi, ritrarre i muscoli circostanti e la ghiandola. Tagliare gli strati protettivi per esporre il nervo ottico.
Il nervo ottico è costituito da fibre nervose mieliniche ricche di lipidi che trasmettono segnali elettrici.
Successivamente, prendi una micropipetta di vetro preassemblata riempita con lisolecitina, un agente che altera i lipidi e un colorante per il tracciamento visivo.
Inserire la micropipetta nel nervo ottico esposto e iniettare la lisolecitina.
Sutura l'incisione cutanea e applica un unguento antibiotico per prevenire l'infezione, quindi lascia che il ratto si riprenda.
Nel nervo ottico, la lisolecitina iniettata interrompe l'integrità della guaina mielinica che circonda le fibre nervose.
Ciò si traduce in demielinizzazione localizzata, riducendo la trasmissione del segnale attraverso il nervo ottico.
Preparare l'animale per l'intervento chirurgico come descritto in precedenza e praticare un'incisione cutanea da 1 a 1,5 centimetri sopra l'orbita di entrambi gli occhi. Con le forbici dell'iride sottile, aprire il tessuto sottocutaneo e accedere alla cavità orbitale. Quindi, sotto uno stereoscopio, aprire la congiuntiva e la capsula del tenone anteriore.
Successivamente, ritrarre i muscoli extraoculari e le ghiandole lacrimali intraorbitali per esporre circa 3 millimetri del nervo ottico. Intorno al nervo ottico, utilizzare una lama oftalmica per aprire longitudinalmente gli strati della dura madre e dell'aracnoide, quindi inserire una micropipetta di vetro collegata a una siringa di Hamilton nel nervo 2 millimetri dietro il globo.
Nell'arco di 30 secondi, iniettare un bolo di lisolecitina con colorante. Per completare la procedura, suturare l'incisione cutanea, applicare un unguento antibiotico per prevenire l'infezione, spostare l'animale su un cuscinetto riscaldante e monitorarlo fino a quando non si riprende.