Induzione dell'infarto acuto del ponte in un modello di ratto mediante stimolazione elettrica

Fissare un ratto anestetizzato in un'unità stereotassica.

Rimuovere il pelo dal cuoio capelluto e igienizzare il sito di incisione. Fai un'incisione sulla linea mediana e ritrai la pelle per esporre il cranio.

Rimuovere il tessuto connettivo per evitare interferenze con il trapano. Identificare il bregma come punto di riferimento per determinare le coordinate del ponte, una struttura situata nel tronco encefalico.

Praticare un foro nel cranio.

Inserire una sonda attraverso il foro per raggiungere il ponte.

Quindi, collegare gli elettrodi a uno stimolatore elettrico, collegando l'anodo alla sonda per la stimolazione cerebrale e il catodo all'orecchio del ratto per completare il circuito.

Erogare un impulso elettrico al ponte, inducendo danni tissutali localizzati o infarto.

Dopo la stimolazione, lasciare brevemente la sonda in posizione per stabilizzare l'effetto di stimolazione.

Quindi, rimuovere lentamente la sonda e sigillare il sito chirurgico con cemento osseo.

Sutura l'incisione e rimetti il ratto nella sua gabbia per il recupero e l'analisi neurologica.

Preriscaldare il termoforo a 37 gradi Celsius immediatamente prima dell'anestesia e fissare il trapano per cranio al supporto sul telaio stereotassico. Confermare la mancanza di risposta al riflesso del pedale nel primo ratto anestetizzato e montare il ratto sul telaio stereotassico in posizione prona sul termoforo. Posizionare le barre auricolari sopra il condotto uditivo per fissare la testa, facendo attenzione che il cranio sia mantenuto orizzontale per evitare qualsiasi inclinazione dell'iniezione.

Applicare un unguento sugli occhi dell'animale e utilizzare un micro-rasoio per rimuovere i peli dal cranio. Usa un pennarello per tracciare una linea di 3 centimetri lungo la linea mediana del cranio dalla linea del canto laterale bilaterale a 0,5 centimetri dietro la fontanella posteriore e usa un bisturi per praticare un'incisione sulla linea mediana lungo la linea segnata. Usa un batuffolo di cotone per rimuovere il sangue e posiziona un pezzo di nastro chirurgico su ciascun lato del lembo cutaneo per esporre il cranio.

Utilizzare un nuovo tampone imbevuto di cloruro di sodio allo 0,9% per rimuovere delicatamente il tessuto connettivo dal cranio e individuare il bregma. Usa un pennarello a punta fine per indicare il punto centrale del bregma come punto di origine. Posizionare il trapano a 6 millimetri antero-posteriore, 2 millimetri mediale-laterale. Utilizzare il trapano per eseguire con cura una craniotomia di 1 millimetro di diametro. Quindi, sostituire il trapano con una sonda calibro 22 con guaina isolata, con la punta posizionata 2 millimetri sopra l'estremità prossimale della guaina.

Inserire la guaina di 7 millimetri nel cervello e far avanzare la sonda lungo la guaina fino a quando la parte superiore della sonda si trova 9 millimetri sotto la superficie del cervello. Collegare gli elettrodi a uno stimolatore elettrico e collegare l'anodo alla sonda. Quindi, collegare il catodo all'orecchio del ratto. Quindi, accendi lo stimolatore elettrico e imposta l'ampiezza del singolo impulso a 4.050 millisecondi, la tensione a 50 volt e la corrente a 4 milliampere.

Lasciare la sonda in posizione per cinque minuti dopo la stimolazione, prima di rimuovere il dispositivo dal cervello. Coprire la craniotomia con cemento osseo e lasciare asciugare il cemento prima di utilizzare filamenti di sutura in poliammide 4-0 per chiudere la ferita. Dopo tre o quattro punti, fare i nodi chirurgici standard 2-1-1. Quindi, iniettare intraperitonealmente nel ratto 250 microlitri di penicillina e monitorare il ratto ogni 15 minuti fino a quando non si sveglia completamente prima di riportare l'animale nella sua gabbia.