Valutazione in vitro dell'amiloide-β aggregata sul collasso del cono di crescita neuronale

Inizia con un vetrino di coltura a più pozzetti contenente neuroni da un embrione di topo in un terreno.

I neuroni mostrano coni di crescita sulla punta dei loro assoni in crescita. Queste strutture includono sottili sporgenze chiamate filopodi ed estensioni simili a fogli chiamate lamellopodi, che consistono in filamenti di actina e microtubuli, componenti del citoscheletro.

Trattare i pozzetti del test con la proteina amiloide-β aggregata, o Aβ, e i pozzetti di controllo con una soluzione veicolo.

Nei pozzetti di test, l'Aβ aggregato si lega ai recettori di membrana, avviando a valle la segnalazione che fosforila le proteine che regolano il citoscheletro.

Le proteine fosforilate distruggono i filamenti di actina e i microtubuli, destabilizzando l'integrità strutturale del cono di crescita e causandone il collasso.

Incubare con un fissativo per preservare la struttura cellulare, quindi lavare le cellule e montarle per l'imaging.

Utilizzando un microscopio, confrontare le strutture cellulari nei pozzetti di test e controllo.

Un aumento dell'incidenza del collasso del cono di crescita nei neuroni trattati con Aβ indica l'effetto tossico degli aggregati di Aβ.

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