Rilevamento di microemorragie cerebrali in un modello di ratto

Le microemorragie cerebrali, o CMH, sono emorragie cerebrali neuroinfiammatorie causate dall'interruzione della barriera emato-encefalica, con conseguente fuoriuscita di globuli rossi, o RBC, nel tessuto cerebrale.

Per rilevare le CMH, iniziare con il tessuto cerebrale fisso di un ratto con CMH.

Immergere il tessuto nel saccarosio per la crioprotezione.

Utilizzando un crio-microtomo, sezionare il tessuto e raccogliere una sezione su un vetrino.

Lavare per rimuovere il fissativo residuo.

Applicare il colorante ematossilina legato a un catione metallico che interagisce con il DNA caricato negativamente, colorando il nucleo di colore rossastro-violaceo.

Seguire con acido-alcol per rimuovere il colorante in eccesso, quindi applicare un agente azzurrante alcalino per neutralizzare l'ambiente acido e convertire il colorante nella sua forma blu, migliorando il contrasto.

Lavare il tessuto con alcool per migliorare la penetrazione delle macchie, quindi applicare l'eosina per colorare i globuli rossi rosso-arancio e i componenti del tessuto di rosa.

Disidratare il tessuto utilizzando concentrazioni crescenti di alcol e pulirlo con xilene per la visualizzazione microscopica.

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