JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 3:25 min. • July 8th, 2025
Inizia con una coltura di neuroni aderenti trattata con aggregati alfa-sinucleina o alfa-S, che sono grumi di una proteina mal ripiegata.
Questi grumi si aggregano per formare inclusioni intracellulari.
Sostituire il supporto con una soluzione di fissaggio per preservare l'integrità cellulare.
Rimuovere la soluzione fissante e lavare con tampone.
Successivamente, aggiungi un tensioattivo per permeabilizzare la membrana cellulare.
Rimuovere il tensioattivo e lavare con tampone.
Introdurre una soluzione bloccante per prevenire il legame di anticorpi non specifici.
Ora, incubare con anticorpi primari che si legano specificamente alle inclusioni alfa-S e alle proteine strutturali.
Lavare con tampone per rimuovere gli anticorpi non legati.
Incubare con anticorpi secondari marcati in fluorescenza.
Rimuovere gli anticorpi non legati.
Aggiungi una macchia fluorescente per etichettare il nucleo.
Rimuovere la macchia e lavare con tampone.
Utilizzando i supporti di montaggio, montare il vetrino coprioggetti con i neuroni su un vetrino.
Sotto un microscopio a fluorescenza, osservare le inclusioni alfa-S immunomarcate all'interno del neurone.
Per eseguire l'immunofluorescenza in una cappa chimi
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