Stabilire un modello di malattia di Alzheimer nel cervello di zebrafish attraverso l'iniezione di peptidi amiloidi

Riempire un capillare di iniezione in vetro con una soluzione di peptidi amiloidi monomerici sintetici, che sono peptidi anomali con proprietà inclini all'aggregazione.

Inserire il capillare in un supporto per microiniezione.

Contemporaneamente mettere un pesce zebra in una capsula di Petri contenente una soluzione anestetica.

Una volta che il pesce è anestetizzato, tienilo lateralmente con una pinza per fissare la testa.

Fai una piccola incisione nel cranio del pesce all'incrocio delle due placche laterali per accedere al proencefalo ricco di neuroni.

Ora, inserisci l'ago capillare attraverso l'incisione e inietta la soluzione di peptide amiloide nel proencefalo.

Trasferire il pesce zebra in un contenitore di recupero con acqua circolante.

All'interno del proencefalo, i peptidi amiloidi si accumulano vicino ai neuroni.

Questi peptidi si ripiegano spontaneamente per formare beta-fogli e si aggregano attorno ai neuroni per formare placche amiloidi tossiche.

Queste placche danneggiano i neuroni e compromettono la loro trasmissione del segnale.

Questo stabilisce un modello di pesce zebra del morbo di Alzheimer, una malattia cerebrale caratterizzata da placche amiloidi.

Utilizzare un estrattore per aghi con i parametri delineati nel protocollo di testo, per preparare i capillari di iniezione in vetro. Regolare l'impostazione della pressione sulla fonte di pressione su 25 PSI. Quindi, sul micro iniettore, impostare la pressione di mantenimento su 20 PSI, la pressione di espulsione su 10 PSI, il valore del periodo su 2,5 e il valore di iniezione su 100 millisecondi. Quindi, caricare il capillare di vetro con la soluzione iniettabile.

Quindi, inserire il capillare di vetro nel supporto per microiniezione e regolare l'angolo di iniezione a 45 gradi. Metti un pesce in una nuova capsula di Petri riempita con una soluzione di anestesia. Una volta anestetizzato, tenere il pesce con una pinza e orientarlo per l'iniezione. Utilizzando la punta di un ago calibro 30, generare una fessura nel cranio sopra il tectum ottico dove si incontrano le due placche laterali. Utilizzare solo la punta dell'ago e non penetrare più di 1 millimetro attraverso il cranio.

Quindi, continuando a tenere il pesce, inserire la punta del capillare di vetro attraverso il sito di incisione. Orientare la punta del capillare di vetro verso il telencefalo con un angolo di 45 gradi, quindi iniettare 1 microlitro di soluzione. Rimetti il pesce in un contenitore per il trasporto finché non si riprende. Quindi, collegare il contenitore all'acqua dei pesci che circola regolarmente per garantire una qualità ottimale dell'acqua.