JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 4:53 min. • July 8th, 2025
Cominciate con un ratto immobilizzato, anestetizzato con il cranio esposto.
Individua il bregma, segna tre punti di riferimento e pratica con cura i fori. Pulisci l'area.
Attraverso uno dei fori, iniettare un fattore di crescita nel nucleo talamico antero-dorsale vicino all'ippocampo.
Fissare due viti in due dei fori, inserire una cannula guida nel terzo foro e fissarle con cemento dentale. Coprire la cannula guida con una cannula fittizia.
Il giorno successivo, inserire la cannula interna nella cannula guida e collegarla al sistema di iniezione.
Iniettare regolarmente peptidi beta-amiloidi e tricloruro di alluminio nel ventricolo laterale del cervello per facilitarne la diffusione nell'ippocampo.
Successivamente, rimuovere il sistema di impianto della cannula. Disinfettare l'area, riempire i fori con cemento osseo e suturare l'incisione.
Nel tempo, i peptidi amiloide-beta si aggregano in placche tossiche.
Il fattore di crescita iniettato e il tricloruro di alluminio migliorano anche la formazione di placche attorno ai neuroni dell'ippocampo, che sono cruciali per la memoria.
Questo porta alla morte neuronale, causando una compromissione della memoria simile al morbo di Alzheimer.
Su un ratto anestetizzato, iniziare tagliando il pelo sul vertice della testa con le forbici chirurgiche e disinfettare con iodoforo.
Successivamente, praticare un'incisione sulla pelle della testa lungo la calvario longitudinale mediana con bisturie chirurgiche e forbici.
Separare il tessuto sottocutaneo e la fascia. Pulisci il calvario del cranio con perossido di idrogeno allo 0,3% e segna il bregma con un pennarello. Quindi, segnare tre punti: il nucleo talamico antero-dorsale per l'iniezione di RHTGF-β1 e il fissaggio di una vite, l'area del ventricolo laterale o del ventricolo sinistro per l'iniezione di Aβ25-35 e AICI3 e, infine, il secondo punto di fissaggio della vite.
Delicatamente, praticare tre fori di 1 millimetro di diametro con un trapano per osso flessibile nei tre punti contrassegnati sul cranio. Fermare l'emorragia e pulire ripetutamente la superficie del cranio con cotone sterile e asciutto.
Successivamente, inserire un ago collegato alla pompa di microiniezione al cervello a una profondità di 4,2 millimetri e iniettare delicatamente 1 microlitro di RHTGF-β1 nell'area dell'ad. Conservare la microiniezione due minuti dopo l'iniezione, quindi estrarla lentamente.
Fissare le due viti nel cranio, indicate nei punti contrassegnati in precedenza con un piccolo cacciavite. Dopo il posizionamento della vite, assemblare il sistema di impianto della cannula inserendo prima la cannula fittizia nella cannula guida dopo la disinfezione con immersione alcolica al 75% per 24 ore. Quindi, inserire la cannula guida del tubo in acciaio inossidabile nel cervello a 4,6 millimetri nell'area del ventricolo sinistro attraverso il foro del cranio, con l'aiuto di un supporto per cannula sull'apparato stereotassico del ratto.
Quindi, mescolare il materiale della base della protesi con l'acqua della base della protesi, in un rapporto di 1,5 grammi per 1 millilitro. Mettere la pasta per coprire la cannula guida, il piedistallo in plastica e le due viti per immobilizzare la cannula guida. Coprire l'intera incisione cutanea per evitare infezioni cutanee.
Il giorno successivo, estrarre la cannula cieca e inserire la cannula interna nella cannula guida. Avvitare la vite di fissaggio per immobilizzare la cannula interna.
Posizionare il tubo in polietilene che collega la pompa di microiniezione alla cannula interna e regolare la velocità di iniezione a 1 microlitro al minuto. Microiniettare l'Aβ25-35 nel ventricolo sinistro. Attendere cinque minuti dopo aver terminato l'iniezione ed estrarre delicatamente la cannula interna. Quindi, inserire nuovamente la cannula cieca nella cannula guida.
Il giorno 15, dopo l'intervento, smontare il sistema di impianto della cannula rimuovendo il materiale di base della protesi solido con forbici chirurgiche e pinze e disinfettando la ferita con iodoforo.
Infine, riempire il foro del cranio con cemento osseo e suturare la pelle con un semplice metodo di sutura interrotta.