JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 2:00 min. • July 8th, 2025
Prendi un topo anestetizzato con micro-ferite sul cuscinetto del piede che espongono lo strato basale, lo strato più profondo dell'epidermide.
Questo strato contiene fibre nervose periferiche collegate ai gangli della radice dorsale, o DRG, vicino al midollo spinale.
Applicare un inoculo di virus della pseudorabbia, che prende di mira il sistema nervoso, sulla ferita e strofinarlo con uno stelo dell'ago per migliorare l'adsorbimento.
Il virus si lega ai recettori della superficie cellulare, il che consente al virus di entrare e iniziare la replicazione.
Le particelle virali si diffondono alle cellule vicine ed entrano nei nervi periferici.
Il virus viaggia quindi verso il DRG e si diffonde attraverso il midollo spinale fino al cervello, infettando i neuroni.
I neuroni infetti rilasciano DAMP, attivando le microglia residenti, che secernono citochine e chemochine per attirare macrofagi e neutrofili.
Queste cellule immunitarie rilasciano specie reattive dell'ossigeno ed enzimi proteolitici che danneggiano i neuroni, portando alla neuroinfiammazione.
Applicare localmente 20 microlitri del titolo appropriato di inoculo virale sul cuscinetto abraso. Eseguire in parallelo simulazioni di inoculazione con il terreno solo nei cuscinetti abrasi delle zampe degli animali di controllo. Dopo ogni applicazione, strofinare delicatamente il cuscinetto per 10 volte con l'asta di un ago per facilitare l'assorbimento del virus ogni 10 minuti per 30 minuti. Quando il cuscinetto del piede abraso è asciutto, lasciare che i topi si riprendano con il monitoraggio fino alla decubito sternale prima di mettere gli animali in gabbie individuali per il follow-up clinico e il campionamento.