JoVE Encyclopedia of Experiments
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 5:05 min • July 8th, 2025
Inizia con un topo anestetizzato con un cranio esposto. Il topo è fissato in un telaio stereotassico contenente una siringa pre-riempita con proteine amiloide-beta inclini all'aggregazione.
Segna il bregma, un punto di riferimento chiave per determinare le coordinate di infusione delle proteine.
Muovi la siringa e tocca il bregma, quindi la lambda, per determinare le coordinate dorso-ventrali, garantendo una profondità precisa dell'ago.
Riposizionare la siringa al di sopra della coordinata mediale-laterale predeterminata, mirando al giro dentato, cruciale per l'elaborazione della memoria.
Toccare la superficie del cranio, assicurandosi che la coordinata dorso-ventrale rientri nel limite, e segnarla. Ripetere questa procedura sul lato opposto.
Forare la coordinata mediale-laterale contrassegnata, iniettare le proteine amiloide-beta nel giro dentato e tenere premuto per prevenire il riflusso.
Forare e iniettare le proteine beta-amiloidi sul lato opposto per una dispersione uniforme delle proteine.
Staccare le barre auricolari dal mouse, quindi suturare l'incisione.
Nel corso del tempo, le proteine beta-amiloidi si aggregano per formare placche che degradano i neuroni del giro dentato e interrompono l'elaborazione della memoria, provocando il morbo di Alzheimer.
Fai un'incisione da 2 a 3 millimetri nella linea mediana del cuoio capelluto con un bisturi. Usa le forbici sottili dritte per estendere la linea di incisione a circa 1,0 centimetri per esporre la sutura sagittale, la bregma e la lambda del cranio. Dopodiché, usa il forcipe per separare la pelle.
Pulisci il cranio con un batuffolo di cotone sterile imbevuto di soluzione fisiologica sterile. Quindi usa un batuffolo di cotone pulito e asciutto per asciugare il cranio. Quindi, segna un punto sulla bregma. Posizionare la siringa di Hamilton utilizzando il micromanipolatore in modo che la punta dell'ago tocchi appena il punto sul bregma. Quindi, registra le coordinate DV.
Segna un punto sul punto lambda. Assicurarsi che l'asse AP del cranio sia a livello spostando la siringa posteriormente fino al punto lambda. La punta dell'ago dovrebbe toccare il punto lambda come ha fatto con il punto bregma. Successivamente, registra la posizione DV. Le coordinate DV per bregma e lambda devono essere entro 0,5 millimetri.
Ora, riporta la punta dell'ago sul punto bregma. Registra la posizione AP di partenza. Quindi, calcolare la posizione AP finale sottraendo 2 millimetri dalla coordinata AP iniziale e riposizionare l'ago della siringa sulla coordinata AP finale.
Quindi, registra la coordinata ML corrente. Calcola le coordinate ML finali sinistra e destra aggiungendo o sottraendo 1,3 millimetri dalla coordinata ML iniziale e sposta l'ago della siringa sulle coordinate ML finali. Tocca la punta dell'ago sulla superficie del cranio su entrambe le coordinate ML finali e assicurati che le coordinate DV siano entro 0,5 millimetri.
Mentre sei alla coordinata ML finale, tira l'ago verso l'alto da 0,5 a 1 centimetro sopra il cranio. Segna un punto sul teschio con un pennarello a punta extra fine di colore scuro. Ripeti questo passaggio per il lato controlaterale del cranio. Quindi, allontanare la siringa.
Praticare un foro sulla coordinata ML sinistra o destra sul cranio utilizzando una punta da trapano da 0,8 millimetri. Ripetere questo passaggio per il lato controlaterale. Successivamente, sposta la siringa in uno dei fori appena introdotti. Abbassa l'ago appena oltre il cranio e fai attenzione a non perforare il cervello.
Per assicurarti che l'ago abbia superato il cranio, spingi delicatamente l'ago contro il cranio per assicurarti che l'ago non fuoriesca dal foro. Quindi, registra la coordinata DV iniziale. Calcola la coordinata DV finale sottraendo 2,2 millimetri dalla coordinata DV iniziale e abbassa l'ago fino alla coordinata DV finale.
Quindi, impostare la pompa dell'iniettore stereotassica in modo da infondere 4 microlitri di Aβ1-42 nel giro dentato a una velocità di 0,5 microlitri al minuto. Dopo l'infusione, lasciare che l'ago rimanga in posizione per un ulteriore minuto per ridurre al minimo il riflusso della soluzione fuori dal sito di iniezione. Successivamente, sposta l'ago sull'altro lato del cervello e ripeti la procedura.
Ora, svita le barre auricolari. Usa le pinze standard degli studenti per chiudere il cuoio capelluto e sigillare la ferita con una sutura. Togli il paranaso e rimuovi il mouse.