Colorazione immunofluorescente di popolazioni neuronali nel tratto gastrointestinale murino embrionale

Prendi un tratto gastrointestinale di topo embrionale fisso e transgenico allo stadio di sviluppo desiderato.

Il sistema nervoso enterico del tratto gastrointestinale comprende neuroni enterici e neuroni colinergici che esprimono colina acetiltransferasi.

Questi neuroni colinergici esprimono anche una proteina fluorescente guidata dal promotore della colina acetiltransferasi.

Incubare il tratto con un detergente non ionico e proteine per permeabilizzare le cellule e prevenire il legame con anticorpi non specifici.

Sostituire con anticorpi primari. Incubare gli anticorpi per legare le loro proteine bersaglio nei neuroni, rispettivamente.

Rimuovere gli anticorpi non legati e lavare con tampone.

Incubare con anticorpi secondari coniugati con fluorofori per legare in modo specifico gli anticorpi primari legati alle proteine bersaglio.

Rimuovere gli anticorpi in eccesso e lavare con tampone.

Immergere il tratto marcato in un terreno di montaggio contenente un colorante nucleare per colorare i nuclei. Ora, monta un vetrino coprioggetti.

Utilizzando la microscopia confocale, visualizza e analizza la distribuzione dei neuroni colinergici nel tratto gastrointestinale.

Posizionare i tratti g