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Neuroscienze
0 visualizzazioni • 2:12 min. • July 8th, 2025
Posizionare un topo transgenico in posizione dorsale. Il topo esprime una forma mutata della proteina alfa-sinucleina, che è incline all'aggregazione.
Prendi una sospensione di fibrille di alfa-sinucleina, aggregati di proteina alfa-sinucleina mal ripiegata.
Iniettare le fibrille nella cavità peritoneale per consentirne la distribuzione sistemica.
Una volta nel flusso sanguigno, le fibrille raggiungono il sistema nervoso centrale e si legano alle cellule endoteliali della barriera emato-encefalica.
Le fibrille vengono trasportate attraverso le vescicole attraverso le cellule ed entrano nel tessuto nervoso. Quindi invadono i neuroni attraverso l'endocitosi e promuovono l'aggregazione delle proteine alfa-sinucleina mutate.
Questi aggregati vengono rilasciati per esocitosi e si diffondono ai neuroni vicini, alle microglia e agli astrociti.
Il riconoscimento degli aggregati innesca la microglia a rilasciare specie reattive dell'ossigeno, che danneggiano il tessuto, e citochine, che reclutano ulteriori cellule immunitarie. Ciò si traduce in neuroinfiammazione che porta alla morte delle cellule neurali.
Consentire al topo di riprendersi per valutare la neuroinfiammazione mediata dall'alfa-sinucleina.
Per le iniezioni intraperitoneali, narcotizzare brevemente gli animali in una camera di anestesia con isoflurano. Ancora una volta, pizzica la punta del piede dell'animale e conferma che non ritiri l'arto posteriore per garantire un'anestesia adeguata. Riempire una siringa ipodermica monouso calibro 27 con 50 microlitri di fibrille di alfa-sinucleina sonicata o PBS.
Tenere l'animale in posizione dorsale, con la testa rivolta lontano dall'investigatore e verso il basso a circa 45 gradi. Iniettare direttamente nel peritoneo del topo senza penetrare nell'intestino tenue o nel cieco situato dietro la parete addominale. Monitorare gli animali fino a quando non si sono ripresi dall'anestesia.