JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 5:36 min. • July 8th, 2025
Inizia con un campione di tessuto cerebrale umano congelato post-mortem proveniente da un caso confermato di malattia neurodegenerativa.
Materia grigia ad accisa ricca di aggregati proteici insolubili, segno distintivo della malattia.
Trasferire il fazzoletto in un omogeneizzatore.
Aggiungere un tampone contenente inibitori e omogeneizzare per rilasciare componenti intracellulari.
Gli inibitori bloccano gli enzimi proteasi e fosfatasi, prevenendo la degradazione delle proteine.
Trasferire l'omogeneizzato in un tubo e aggiungere un tampone detergente ionico. Incubare.
Il detergente solubilizza le proteine ripiegate in modo nativo, mentre gli aggregati proteici mal ripiegati rimangono intatti.
Sonicare per completare la dissociazione cellulare.
Trasferire l'omogeneizzato in una provetta da ultracentrifuga e centrifugare ad alta velocità.
Gli aggregati si depositano sul fondo.
Rimuovere il surnatante contenente proteine solubili in detergenti.
Lavare gli aggregati con un tampone detergente ionico, centrifugare e rimuovere il surnatante.
Aggiungere un tampone di urea per denaturare gli aggregati proteici, rendendoli solubili.
Trasferire gli aggregati proteici solubilizzati in una prove
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