Valutazione della funzione motoria in un modello murino sperimentale di neurite autoimmune

Posiziona un mouse su un tapis roulant per registrare il suo movimento di corsa, valutando la sua funzione motoria, che rappresenta la capacità di controllare i movimenti del corpo.

Dopo il test, iniettare la tossina della pertosse nella cavità addominale del topo anestetizzato, per indebolire la sua barriera emato-nervosa.

Quindi, rimuovere i peli tra le scapole del topo, disinfettare l'area e iniettare peptidi che imitano la mielina con un adiuvante nel tessuto sottocutaneo.

Ripetere entrambe le iniezioni per reazioni ottimali.

I peptidi stimolano le cellule presentanti l'antigene, che migrano verso i linfonodi e producono cellule T autoreattive.

Queste cellule T entrano nel flusso sanguigno, attraversano la barriera emato-nervosa compromessa e prendono di mira i nervi periferici, portando al rilascio di citochine.

Questo attrae i macrofagi e le cellule B, che rilasciano molecole effettrici che degradano la guaina mielinica.

La rottura della mielina compromette la trasmissione del segnale nervoso e l'insorgenza della neurite autoimmune sperimentale o EAN.

Infine, ripetere il test del tapis roulant. Il topo mostra difficoltà a correre e coordinare i movimenti degli arti, indicando una disfunzione motoria.

Tre giorni prima dell'induzione della malattia, accendere l'apparecchio di valutazione della funzione motoria e accendere il pulsante della luce. Prendi il topo e abbassalo su un contenitore di colorante alimentare rosso. Posiziona il mouse nello scomparto pedonale e imposta la velocità del tapis roulant a 15 centimetri al secondo. Accendi il tapis roulant e fai clic su "registra" per utilizzare il sistema di imaging della funzione andatura per catturare il movimento di corsa del mouse per 36 secondi.

Dopo 36 secondi, interrompere la registrazione e il tapis roulant e salvare il file video della corsa di prova nella cartella designata.

Un giorno prima della prima immunizzazione, utilizzare una siringa da 0,5 millilitri dotata di un ago da 30_1/2 gauge per somministrare 1,6 microgrammi per millilitro di tossina della pertosse in 250 microlitri di topo isotonico PBS IP, a topi maschi C57 neri anestetizzati di sei-otto settimane.

Il giorno successivo, combinare volumi uguali di soluzioni di peptide appena preparate in soluzione fisiologica allo 0,9% e 20 milligrammi per millilitro di Mycobacterium tuberculosis in un coadiuvante di Freund completo in un battitore di microsfere e mescolare le soluzioni alla massima velocità per 1 minuto a temperatura ambiente.

Caricare una siringa dotata di un ago calibro 23 con l'inoculo, capovolgere e agitare la siringa prima di evacuare l'aria all'interno dello stelo della siringa.

Prima di somministrare l'inoculo, rimuovere i peli appena lateralmente alla linea mediana tra le scapole e disinfettare la pelle esposta con etanolo al 70%.

Quindi, utilizzare un paio di pinze Addison per afferrare la pelle e somministrare 50 microlitri di soluzione al topo iniettato con la tossina della pertosse tramite iniezione sottocutanea.

La mattina successiva, somministrare 1,2 microgrammi per millilitro di tossina della pertosse in 250 microlitri di PBS IP, come appena dimostrato, seguiti da un'altra iniezione di 1,2 microgrammi per millilitro di tossina della pertosse IP 48 ore dopo.

Tre giorni dopo, dopo la terza iniezione di pertosse, somministrare altri 50 microlitri di inoculo appena preparato nello stesso sito di iniezione di prima e monitorare il punteggio clinico e la funzione motoria degli animali due volte a settimana fino alla fine dell'esperimento.