Generazione di una lesione da taglio corticale in un modello murino per indurre l'astrogliosi reattiva

Fissare un topo anestetizzato in un telaio stereotassico.

Radergli la testa e disinfettare il sito. Applicare un unguento per gli occhi per prevenire l'essiccazione corneale.

Fai un'incisione per esporre il cranio.

Rimuovere le membrane sovrastanti e pulire la superficie con soluzione fisiologica.

Segna una regione sul cranio, mirando alla corteccia.

Forare lungo la regione contrassegnata. Applicare soluzione salina per mantenere l'idratazione dei tessuti.

Rimuovere il pezzo di osso allentato, esponendo la corteccia sottostante.

Posizionare la schiuma di gel imbevuta di soluzione salina per prevenire l'essiccazione dei tessuti e assorbire il sangue.

Posizionare una lama sterile attaccata a un supporto della sonda sopra la corteccia. Quindi, rimuovere la schiuma di gel.

Abbassa la lama per penetrare nella corteccia e muovila orizzontalmente con colpi ripetuti per creare una lesione meccanica.

Rimuovere la lama e utilizzare schiuma di gel per assorbire il sangue. Sutura l'incisione chirurgica.

Nel sito della lesione, gli astrociti subiscono una gliosi reattiva, dove si attivano e proliferano, rilasciando molecole protettive che riducono l'infiammazione e supportano la riparazione dei tessuti.

In questo passaggio, posizionare un mouse completamente sedato nel fotogramma stereotassico. Fissare il naso nel cono del naso, che è collegato all'isoflurano. Quindi, stringere le barre auricolari e assicurarsi che la testa sia stabile.

Radere la testa dall'altezza degli occhi all'altezza delle orecchie. Quindi sterilizzare la pelle con tre scrub alternati di alcool isopropilico e soluzione di iodio betadinario. Successivamente, applica un unguento su entrambi gli occhi per evitare che si secchino.

Monitora la profondità dell'anestesia dell'animale pizzicandogli l'alluce o la coda. Il topo si trova sul piano chirurgico appropriato quando non c'è risposta e la respirazione è lenta e uniforme. Praticare un'incisione cutanea parasagittale da dietro gli occhi fino quasi al punto tra le orecchie con un unico taglio deciso. Sposta la pelle da parte e aggancia il lato destro con un emostato.

Al microscopio, eliminare la membrana sovrastante sul cranio utilizzando il lato opaco del bisturi e gli applicatori con punta di cotone. Quindi pulire il teschio con un applicatore con punta di cotone imbevuto di soluzione salina allo 0,9% e lasciarlo asciugare completamente. Utilizzando un piccolo righello e un pennarello indelebile, segnare il bordo anteriore della craniotomia a 1 millimetro caudale rispetto alla sutura coronale e quindi contrassegnare il bordo sinistro della craniotomia a 1 millimetro lateralmente alla sutura sagittale.

Quindi, segnare i bordi destro e caudale della craniotomia a 4 millimetri rispettivamente dalle suture sagittale e coronale. Usando una punta da trapano da 0,5, fora con cura il contorno del pennarello indelebile e assicurati di non sfondare completamente il cranio. Premere delicatamente sul pezzo isolato di osso parietale con una pinza. L'osso assottigliato è pronto per la rimozione quando è sufficientemente debole attorno al perimetro.

Ora, utilizzando una siringa da 10 millilitri dotata di un ago calibro 23, applicare una piccola quantità di soluzione fisiologica allo 0,9% sull'osso isolato e sull'area perforata. Fissare il braccio del manipolatore all'apparato stereotassico. Quindi collegare una nuova lama di bisturi al supporto della sonda con il lato affilato rivolto rostralmente.

Tenendo il braccio del manipolatore fuori mano, sollevare con cautela il pezzo di osso con un paio di pinze angolate inserendo la punta nel lato dell'osso ed estraendola con un solo movimento. Quindi posizionare un pezzetto di schiuma di gel assorbibile imbevuta sul cervello scoperto per evitare che si secchi e assorba il sangue che potrebbe essere presente. Una volta che la schiuma di gel è stata posizionata sul cervello, fai oscillare il braccio del manipolatore in posizione. Regolare la lama in modo che sia centrata sulla schiuma di gel.

Quindi rimuovere la schiuma di gel e abbassare la lama fino a quando la punta tocca la dura madre senza forarla. Segnare le coordinate dorso-ventrali utilizzando la scala del nonio sul braccio verticale del sistema stereotassico. Successivamente, usando il braccio manipolatore, abbassare lentamente la lama esattamente di 3 millimetri nel cervello. Lasciare che la lama rimanga in posizione per 5-10 secondi.

Quindi muovere lentamente il braccio stereotassico con la lama in direzione rostrale-caudale per tre volte. Lasciare che la lama raggiunga i confini rostrale e caudale della craniotomia prima di spostarsi all'estremità opposta. Successivamente, solleva lentamente il braccio stereotassico e rimuovi la lama dal cervello.

Posiziona immediatamente un altro pezzo di schiuma gel sulla superficie del cervello per assorbire il sangue o il liquido in eccesso. Nel frattempo, rimuovere il braccio stereotassico e smaltire la lama del bisturi. Una volta che l'emorragia si è fermata, rimuovere la schiuma di gel.

Chiudere la ferita suturando la pelle con punti di sutura non assorbibili, come l'Ethilon o il Prolene, e rimuovere i punti di sutura da 9 a 10 giorni dopo l'intervento. Successivamente, somministrare da 0,5 a 1 millilitro di soluzione di Ringer lattato per via sottocutanea, per garantire l'idratazione.