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Neuroscienze
0 visualizzazioni • 2:18 min. • July 8th, 2025
Prendete un cervello di topo perfuso nel buffer.
Il cervello è infettato da Listeria monocytogenes, un batterio patogeno resistente alla streptomicina.
La fase di perfusione rimuove il sangue dal cervello, assicurando che le misurazioni della carica batterica riflettano il carico di Listeria monocytogenes nel tessuto.
Successivamente, omogeneizzare il cervello utilizzando un omogeneizzatore sterilizzato per abbattere il tessuto e rilasciare i batteri.
Ora, preparare diluizioni seriali dell'omogeneizzato cerebrale utilizzando il tampone.
Piastra queste diluizioni su piastre di agar per infusione cardiaca cerebrale contenenti streptomicina, un antibiotico.
Incubare le piastre. L'agar per infusione di cuore cerebrale fornisce nutrienti per la crescita di Listeria monocytogenes, mentre la streptomicina seleziona i batteri resistenti, consentendo solo la formazione di colonie di Listeria resistenti alla streptomicina.
Conta il numero di colonie sulla piastra per determinare le unità formanti colonie, una misura della carica batterica infettiva vitale nel cervello.
Usando una pinza, apri il cranio per esporre il cervello e posiziona una spatola tra la parte inferiore del cervello e la base del cranio per trasferire con cura il cervello in un tubo da 15 millilitri contenente 5 millilitri di PBS a 4 gradi Celsius.
In una cappa di biosicurezza, inserire il puntale e far funzionare un omogeneizzatore tissutale per 10 secondi in soluzioni sequenziali di candeggina al 5%, acqua sterile, etanolo al 75% e acqua sterile in provette coniche separate da 15 millilitri. Quando la punta è stata accuratamente sterilizzata, omogeneizzare il cervello infetto nel suo tubo.
Preparare diluizioni seriali decuplicate di ciascun organo omogeneizzato in PBS sterile e impiattare le diluizioni su piastre di agar per infusione cardiaca cerebrale. Quindi, incubare le colture di diluizione dell'omogeneizzato a 37 gradi Celsius durante la notte e contare il numero di colonie su ciascuna piastra per determinare il numero totale di batteri per organo o millilitro di sangue.