Rilevamento della co-localizzazione dell'orexina e del recettore dei cannabinoidi nel pesce zebra obeso indotto dalla dieta

Nel cervello del pesce zebra, i neuroni esprimono i recettori dell'oressina e dei cannabinoidi che regolano il metabolismo.

Nel pesce zebra obeso indotto dalla dieta, o DIO, questi recettori co-localizzano sempre più per formare eteromeri, alterando la segnalazione a valle e influenzando la regolazione metabolica.

Prelevare criosezioni del tessuto cerebrale sia dal pesce zebra di controllo che da DIO. Lavare le sezioni con tampone per rimuovere il mezzo di inclusione.

Trattare con un tampone bloccante la permeabilizzazione per permeabilizzare le membrane cellulari e mascherare i siti di legame non specifici. Lavare per rimuovere il tampone in eccesso.

Incubare con un cocktail di anticorpi primari mirati ai recettori. Lavare per rimuovere gli anticorpi non legati.

Incubare con diversi anticorpi secondari marcati con fluorofori che si legano agli anticorpi primari. Lavare per rimuovere gli anticorpi non legati.

Aggiungi un colorante fluorescente legante il DNA per etichettare il nucleo. Quindi, applicare un mezzo di montaggio e sigillare le sezioni con un vetrino coprioggetti.

Utilizzando un microscopio confocale, rilevare la fluorescenza degli anticorpi. L'aumento della co-localizza