JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
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Inizia con una piastra multipozzetto contenente una barriera emato-encefalica in vitro o un modello BEE.
Questo modello è costituito da cellule endoteliali aderenti al lato superiore o sanguigno e astrociti sul lato inferiore o cerebrale di un inserto di membrana rivestito di matrice.
Aggiungere l'isotiocianato di fluoresceina o FITC, un colorante fluorescente, nella camera superiore di un pozzetto di controllo.
Al contrario, aggiungere ferritina caricata con FITC, o ferritina FITC, alla camera superiore di un pozzetto per campioni e quindi incubare.
Nel pozzetto di controllo, il FITC libero rimane confinato nella camera superiore, con un attraversamento minimo attraverso la BBB.
Nel frattempo, nel pozzetto del campione, i complessi FITC-ferritina si legano ai recettori sulle cellule endoteliali.
Ciò consente l'internalizzazione mediata dal recettore e il trasporto nella camera inferiore.
Successivamente, raccogliere regolarmente il terreno dalle camere inferiori di entrambi i pozzetti e misurare l'intensità della fluorescenza.
Il controllo mostra una fluorescenza inferiore, mentre il campione mostra una fluorescenza più elevata, confermando la permeabilità differenziale della BBB
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