Ottenimento di sospensioni cellulari da tessuti cerebrali ischemici di topo
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 3:47 min. • July 8th, 2025
Prendi i tessuti cerebrali ischemici di topo perfusi contenenti cellule cerebrali e cellule immunitarie infiltrate.
Tritare i fazzoletti su un colino e risciacquare con tampone.
Centrifugare il filtrato ed eliminare il surnatante.
Risospendere il pellet in una soluzione di enzimi digestivi e trasferirlo in una provetta da microcentrifuga.
Incubare per gli enzimi digestivi per abbattere la matrice extracellulare, allentando le cellule.
Filtrare la sospensione e risciacquare con un tampone contenente DNasi per rimuovere il DNA contaminante.
Quindi, lavare con un tampone privo di DNasi.
Centrifugare il filtrato ed eliminare il surnatante.
Risospendere le celle in un mezzo di gradiente di densità. Quindi, trasferire il contenuto in un tubo nuovo e mescolare. Centrifuga per separare i componenti per densità.
Rimuovere il surnatante contenente mielina e detriti.
Risospendere il pellet in un tampone privo di DNasi. Trasferirlo in una nuova provetta e centrifugare nuovamente.
Scartare il surnatante per garantire una rimozione sufficiente del mezzo del gradiente di densità.
Infine, risospendere le cellule nel tampone per ulteriori analisi.
Usando l'estremità dello stantuffo di una siringa d
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