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Neuroscienze
0 visualizzazioni • 3:43 min • July 8th, 2025
Prendi una siringa piena di levodopa, un precursore della dopamina e un inibitore della conversione della dopamina.
Iniettare questa soluzione nel tessuto sottocutaneo di un ratto trattenuto con malattia di Parkinson, che presenta neuroni danneggiati che producono dopamina.
Nel ratto, l'inibitore si lega agli enzimi che producono dopamina e previene la conversione prematura della levodopa in dopamina.
La levodopa entra nel flusso sanguigno, attraversa la barriera emato-encefalica attraverso i canali degli aminoacidi ed entra nei neuroni produttori di dopamina non danneggiati.
Gli enzimi in questi neuroni convertono la levodopa in dopamina, un neurotrasmettitore eccitatorio, e la rilasciano nella sinapsi.
La dopamina si lega ai suoi recettori sui neuroni post-sinaptici, innescando la trasmissione del segnale.
Ripetere periodicamente le iniezioni per aumentare la produzione di dopamina.
Nel tempo, l'eccesso di dopamina porta a una sovrastimolazione dei suoi recettori e a un'eccessiva segnalazione neuronale, che alla fine interrompe i movimenti del corpo del ratto.
Metti il topo in una gabbia e osserva il suo comportamento. Il ratto mostra movimenti corporei involontari e ripetitivi, noti come discinesie, indotti dalla levodopa.
Prima dell'iniezione di L-DOPA, aggiungere il volume appropriato di soluzione fisiologica sterile alla miscela di L-DOPA e benserazide pre-pesata e liofilizzata nel flaconcino di ambra e agitare bene per 10 secondi. Immediatamente dopo la preparazione, riempire il volume richiesto della miscela di L-DOPA-benserazide per ogni animale in siringhe individuali, montate con un ago calibro 26, ed etichettare ogni siringa con un identificativo individuale.
Dopo aver portato la prima gabbia sul banco di iniezione, rimuovere il ratto dalla sua gabbia per posizionarlo sulla superficie di iniezione. Usa la mano non dominante per trattenere la testa e le spalle del ratto con il palmo contro la superficie e strofina la pelle sul dorso sovrastante le scapole con il pollice e l'indice. Utilizzare la mano dominante per iniettare il volume di L-DOPA nello spazio sottocutaneo tra le dita, mantenendo l'ago parallelo al corpo per evitare l'iniezione intramuscolare.
Dopo l'iniezione, spostare il ratto nella gabbia. Quindi, imposta il timer per uno o due minuti e ripeti la procedura, iniettando un ratto ogni uno o due minuti fino a quando tutti i ratti non vengono iniettati. Il giorno della valutazione, posizionare un timer accanto alla gabbia per osservare la discinesia indotta dalla levodopa, o intensità del comportamento della LID, stimando la frequenza di un determinato comportamento durante il periodo di valutazione.
Valutare l'intensità e la frequenza dei movimenti distonici e ipercinetici della discinesia, compresa l'insorgenza iniziale del comportamento LID, il picco di comportamento e la fase di declino al numero desiderato di punti temporali. Se si utilizzano intervalli di valutazione di un minuto, impostare un timer per un minuto per valutare il primo ratto e continuare la valutazione attraverso tutti i ratti a intervalli di un minuto.