Rilevamento dell'invecchiamento neuronale in una sezione di organoide corticale

Inizia con un vetrino contenente una sezione sottile di un organoide corticale che contiene cellule gliali e neuroni in vari stadi di invecchiamento.

I neuroni che invecchiano, in uno stato di senescenza con funzione cellulare in declino, contengono alti livelli di beta-galattosidasi.

La sezione è pretrattata con un fissativo per stabilizzare la struttura cellulare e un agente permeabilizzante per permeabilizzare le loro membrane.

Posizionare il vetrino in un contenitore colorante per lavarlo con un tampone per rimuovere eventuali tracce di soluzione.

Colorare il vetrino con una soluzione contenente un substrato per l'enzima beta-galattosidasi e incubare.

Il substrato entra nelle cellule, dove la beta-galattosidasi scinde il substrato, producendo un prodotto di colore blu che si accumula maggiormente nei neuroni che invecchiano.

Lavare ripetutamente la sezione.

Aggiungere un montante antisbiadimento e lasciarlo solidificare, garantendo l'integrità della sezione macchiata.

Osservare il vetrino al microscopio; l'area con un prodotto di colore blu intenso indica l'invecchiamento dei neuroni all'interno dell'organoide.

Dopo la criosezione degli organoidi, rimuovere la soluzione di mont