JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 3:05 min. • July 8th, 2025
Inizia con un topo anestetizzato fissato in un apparato stereotassico con la testa rasata.
Disinfettare il cuoio capelluto e praticare un'incisione per esporre il cranio.
Pulisci il cranio per rimuovere lo strato di tessuto connettivo.
Usando il punto di riferimento sul cranio, segna il sito di destinazione e pratica un foro.
Assumere una siringa contenente una soluzione di lisofosfatidilcolina, o LPC, fissata sull'apparato stereotassico.
Determinare le coordinate di due punti di iniezione nella regione della sostanza bianca del cervello e posizionare la siringa di conseguenza.
Iniettare la soluzione LPC e tenere l'ago in posizione per un po' di tempo dopo l'iniezione in ogni sito.
Sutura l'incisione e lascia che l'animale si riprenda.
Nel sito di iniezione, l'LPC interagisce direttamente con la mielina, interrompendone la struttura e causandone la rottura.
Ciò provoca una disfunzione neuronale locale, stabilendo così un modello di demielinizzazione focale.
Inizia collegando un ago calibro 32 a una siringa da cinque microlitri. Prelevare 5 microlitri di soluzione LPC per la preparazione dell'iniezione. Successivamente, confermare la profondità dell'anestesia del topo dalla mancanza di riflesso di pizzicamento delle dita dei piedi, mentre la respirazione è regolare. Posizionare il mouse in una cornice stereotassica con il lato dorsale rivolto verso l'alto e fissare la testa con un cono e un morsetto per denti.
Fissare il mouse all'apparato stereotassico con le barre auricolari bilaterali. Assicurarsi che le barre auricolari siano a livello e che la testa sia orizzontale e stabile. Disinfettare la pelle della testa strofinando con iodoforo. Quindi, usa il bisturi per tagliare una piccola incisione a circa 1,5 centimetri lungo la linea mediana del cuoio capelluto per esporre il cranio. Pulisci il cranio con un batuffolo di cotone imbevuto di perossido di idrogeno all'1% fino a quando la bregma, la lambda e la fontanella posteriore non sono esposte.
Posizionare la siringa sull'apparato stereotassico. Garantire il posizionamento orizzontale dell'animale e individuare il corpo calloso. Una volta determinato il sito di iniezione, registrare le coordinate e fare un segno con un pennarello sul cranio. Forare delicatamente il sito contrassegnato con un trapano per cranio. Fare attenzione a evitare qualsiasi sanguinamento.
Sposta lentamente l'ago alle coordinate indicate. Per indurre la demielinizzazione del corpo calloso, iniettare 2 microlitri di soluzione di LPC in ciascun sito di iniezione a una velocità di 0,4 microlitri al minuto. Dopo l'iniezione, tenere l'ago in ogni sito per altri 10 minuti. Infine, sutura la pelle con una sutura 4-0 e attendi che l'animale si svegli entro 10 minuti.