JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 4:03 min. • July 8th, 2025
Prendiamo un topo adulto transgenico anestetizzato portatore di una mutazione genetica che porta a canali del sodio disfunzionali negli interneuroni inibitori.
Fissare una sonda rettale lubrificata per monitorarne la temperatura corporea.
Metti il topo in una gabbia di recupero fino a quando la sua temperatura corporea non si stabilizza.
Quindi, trasferisci l'animale in una camera termica preriscaldata e inizia la registrazione video.
Aumentare la temperatura della camera a intervalli regolari monitorando l'aumento graduale della temperatura corporea del topo.
All'aumentare della temperatura corporea, la disfunzione dei canali del sodio peggiora, riducendo il rilascio di neurotrasmettitori inibitori.
Questo rilascio ridotto interrompe l'equilibrio tra eccitazione e inibizione neuronale, con conseguente ipereccitabilità neuronale e convulsioni.
Registrare la temperatura corporea durante la crisi e annotare le sue caratteristiche comportamentali.
Ora, posiziona il mouse su un tappetino di raffreddamento fino a quando la sua temperatura corporea non si normalizza.
Infine, rimuovere la sonda rettale e consentire al topo di riprendersi.
Inizia accendendo la camera di calore del mouse, con il pulsante di accensione e quindi premi il pulsante di accensione. Utilizzando la tastiera del regolatore di temperatura digitale, impostare la temperatura della camera termica a 50 gradi Celsius. Rivestire il pavimento della camera di calore con lettiera di pannocchia.
Montare una telecamera di registrazione video davanti alla camera termica. Foderare una capsula di Petri di 140 millimetri di diametro con spessi strati di carta velina e posizionarla sul ghiaccio per fungere da cuscinetto di raffreddamento. Per il test di screening, assicurarsi che il peso corporeo del topo sia pari o superiore a 15 grammi. Prima di iniziare la procedura, verificare che il mouse sia completamente anestetizzato con un pizzico per le dita dei piedi.
Rivestire la punta metallica della sonda di temperatura rettale con un lubrificante e inserirla delicatamente nel mouse. Fissare la sonda rettale alla coda del topo con del nastro adesivo. Metti il topo in una nuova gabbia di recupero rivestita con lettiera di pannocchie. Avvia un timer e osserva il mouse per 5 minuti monitorando la temperatura corporea interna fino a quando il mouse non si riprende completamente dall'anestesia e la temperatura si stabilizza a 35-36 gradi Celsius.
Al termine dei 5 minuti, annotare la temperatura corporea del mouse come temperatura corporea iniziale a 0 minuti. Trasferisci rapidamente il mouse sul pavimento della camera termica del topo preriscaldata per iniziare la prova dell'esperimento. Dopo aver posizionato il mouse nella camera del mouse preriscaldata, avviare la fotocamera e il cronometro.
Aumentare la temperatura della camera di calore a intervalli regolari, in modo tale che la temperatura corporea del topo aumenti a una velocità compresa tra 0,25 e 0,5 gradi Celsius al minuto. Inizia a registrare la temperatura corporea del topo a intervalli di 1 minuto per tutta la durata dell'esperimento. A 9,5 minuti, impostare la temperatura della camera di calore a 55 gradi Celsius, per stabilizzare la temperatura della camera di calore a 55 gradi Celsius entro il 10° minuto.
Allo stesso modo, raggiungere una temperatura stabile della camera di calore a 60 gradi Celsius entro il 20° minuto. Ogni prova di screening delle crisi dura 30 minuti. Se il topo subisce una crisi, registrare la temperatura corporea del topo durante la crisi come temperatura di soglia della crisi. Prendi nota delle caratteristiche del comportamento convulsivo mostrate dal mouse.
Quindi, raccogli rapidamente il mouse dalla camera e posizionalo sul pad di raffreddamento. Quando la temperatura corporea del topo scende a 36-37 gradi Celsius, trasferisci il topo in una gabbia di recupero. Per rimuovere la sonda rettale dal mouse, tagliare con cura il nastro tra la coda del topo e il filo della sonda rettale.