Immunocolorazione degli interneuroni in una sezione ippocampale di ratto

Prendiamo una sezione ippocampale fissa di ratto contenente un interneurone riempito di biocitina, una molecola coniugata con biotina.

Successivamente, aggiungi una soluzione contenente proteine bloccanti e un detergente non ionico per prevenire il legame non specifico e permeabilizzare i neuroni.

Incubare con un anticorpo primario che ha come bersaglio specifici recettori dei cannabinoidi sugli interneuroni.

Lavare con tampone per rimuovere gli anticorpi in eccesso.

Quindi, aggiungere un colorante fluorescente coniugato con streptavidina e un anticorpo secondario coniugato con fluoroforo.

Durante l'incubazione, la streptavidina si lega fortemente alla biocitina, consentendo la visualizzazione dell'interneurone pieno di biocitina, mentre l'anticorpo secondario prende di mira gli anticorpi primari legati al recettore sugli interneuroni.

Risciacquare con tampone, rimuovendo le molecole non legate.

A questo punto, montare la sezione utilizzando un mezzo di montaggio acquoso. Posizionare un vetrino coprioggetti e sigillarlo.

Utilizzando un microscopio a fluorescenza, visualizza l'espressione dell'interneurone pieno di biocitina e del recettore dei cannabinoidi, consentendo l'analisi de